酵母菌的轉(zhuǎn)錄因子蛋白由BD和AD兩部分組成且結(jié)合在一起。BD負(fù)責(zé)與啟動(dòng)子上游序列結(jié)合,AD負(fù)責(zé)激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄。只有AD和BD同時(shí)存在且結(jié)合在一起時(shí)才能保證基因M的轉(zhuǎn)錄(如圖所示)?;騇能表達(dá)時(shí),酵母菌才能在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上生長。
(1)酵母菌培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì),在酵母菌的純培養(yǎng)過程中,采用 平板劃線法或稀釋涂布平板平板劃線法或稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上。
(2)將BD與AD分開,BD基因與X基因共連一個(gè)載體,可表達(dá)出BD-X融合蛋白;AD基因與Y基因共連一個(gè)載體,可表達(dá)出AD-Y融合蛋白。將兩個(gè)載體同時(shí)導(dǎo)入一個(gè)酵母細(xì)胞中,可以檢測X蛋白與Y蛋白是否存在相互作用(即是否可以結(jié)合),這種檢測方法稱為酵母雙雜交。
①從到酵母細(xì)胞中提取蛋白質(zhì),進(jìn)行 抗原-抗體抗原-抗體雜交,以檢測是否產(chǎn)生M蛋白。若將酵母菌培養(yǎng)在 缺乏組氨酸缺乏組氨酸培養(yǎng)基中,酵母菌仍然可以生長,則說明 X蛋白與Y蛋白存在相互作用X蛋白與Y蛋白存在相互作用。
②在酵母雙雜交的檢測中可能出現(xiàn)假陽性的結(jié)果,原因是 X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的活性(或X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的功能或X蛋白具有AD蛋白的功能)X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的活性(或X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的功能或X蛋白具有AD蛋白的功能)。
【考點(diǎn)】微生物的純培養(yǎng);基因工程的操作過程綜合.
【答案】氮源;平板劃線法或稀釋涂布平板;抗原-抗體;缺乏組氨酸;X蛋白與Y蛋白存在相互作用;X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的活性(或X蛋白具有激活啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的功能或X蛋白具有AD蛋白的功能)
【解答】
【點(diǎn)評】
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