凝乳酶是食品生產(chǎn)中常用的凝結(jié)劑，科研人員從動物體內(nèi)獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過基因工程生產(chǎn)凝乳酶。據(jù)下圖回答下列問題：
（1）利用凝乳酶mRNA，在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進一步通過PCR擴增時需要2種引物，引物的作用是 與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）。
（2）圖1和圖2是選用的質(zhì)粒及其幾種相關限制酶的識別位點，在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是 EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ，這樣選擇的優(yōu)點是 避免標記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）避免標記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）（答出兩點）。為在凝乳酶基因兩側(cè)加上相應的酶切位點，設計引物時需在引物前添加相應酶切位點，PCR過程中至少復制 33次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
（3）將構(gòu)建的重組質(zhì)粒導入大腸桿菌，需要用鈣離子處理，使大腸桿菌處于 感受態(tài)感受態(tài)。
（4）將在添加了青霉素的培養(yǎng)基中得到的4個大腸桿菌菌落，進行進一步檢測，檢測結(jié)果如圖3所示，1～4號菌落需要舍棄的是1號和 2號、3號2號、3號。其中舍棄1號菌落的理由是 目的基因未導入目的基因未導入。
（5）為滿足生產(chǎn)上的需要對凝乳酶進行改良，這種技術屬于 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程，該工程的改造的對象是 基因基因。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）；EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ；避免標記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）；3；感受態(tài)；2號、3號；目的基因未導入；蛋白質(zhì)；基因
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：110引用：8難度：0.7 -
2．自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進行數(shù)量的測定。下面是有關土壤中分解尿素的細菌分離和計數(shù)的實驗過程，請回答有關問題。
（1）為分離出土壤中分解尿素的細菌，應該用的培養(yǎng)基進行分離，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基（按功能分類）?？稍谂囵B(yǎng)基中加入指示劑對該類微生物鑒別。
（2）若取土樣6g,應加入mL的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成101～107不同濃度的土壤溶液。將103～107倍的稀釋液分別吸取0.2mL加入到固體培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液鋪平，每個稀釋度下至少涂布3個平板，這種接種方法稱為。將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h,觀察并統(tǒng)計菌落數(shù)，結(jié)果如表，其中倍的稀釋比較合適，由此計算出每克土壤中的菌落數(shù)為。這種方法測定的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目（低/高）。
（3）若研究尿素分解菌的群體生長規(guī)律，可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。操作時，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是稀釋倍數(shù) 103 104 105 106 107 菌落數(shù)
（個）1號平板 478 367 277 26 5 2號平板 496 354 261 20 8 3號平板 509 332 254 29 3 。將分離純化后的單個菌落進行液體培養(yǎng)，可采用定期取樣的方法進行計數(shù)。若以一個大方格（體積為0.1mm3）有25個中方格的計數(shù)板為例進行計算，設五個中方格中總菌數(shù)為45，菌液稀釋倍數(shù)為102，那么原菌液的菌群密度為個/mL。發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：47引用：4難度：0.6 -
3．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應用的除草劑，能抑制土壤細菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細菌菌株，并對其計數(shù)（如圖所示），以期為修復污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7
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