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某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中,需要表達N蛋白胞外段,制備相應的單克隆抗體,增加其對N蛋白胞外段特異性結(jié)合的能力。N蛋白胞外段單克隆抗體制備流程如圖1:
菁優(yōu)網(wǎng)
(1)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后,取小鼠腺組織用
機械
機械
方法或
胰蛋白
胰蛋白
酶處理,制成細胞懸液,置于含有
95%空氣和5%的CO2
95%空氣和5%的CO2
氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),離心收集小鼠的B淋巴細胞,與骨髓瘤細胞進行融合。
(2)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選,獲得雜交瘤細胞,將其接種到96孔板,進行
克隆化
克隆化
培養(yǎng)。用
抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
技術(shù)檢測每孔中的抗體,篩選既能產(chǎn)生N蛋白胞外段抗體,又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株,經(jīng)體外擴大培養(yǎng),收集
細胞培養(yǎng)液
細胞培養(yǎng)液
,提取單克隆抗體。
(3)利用上述流程制備的N蛋白胞外段抗體能準確識別
抗原
抗原
的細微差異,與之發(fā)生特異性結(jié)合,并可
大量制備
大量制備
,因此被廣泛用作診斷試劑。
(4)利用小鼠制備的抗體是鼠源抗體,鼠源抗體具有外源性,會被人體免疫系統(tǒng)當作抗原而清除(稱為人抗鼠抗體反應即HAMA反應)??贵w結(jié)構(gòu)示意圖如圖2,引起HAMA反應的主要是“C區(qū)”,通過制備人鼠嵌合抗體可以解決HAMA反應?,F(xiàn)利用重組DNA技術(shù)可以制備人鼠嵌合抗體,請寫出簡要制備思路:
將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達載體,利用顯微注射技術(shù)將表達載體導入哺乳動物細胞中,表達出嵌合抗體
將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達載體,利用顯微注射技術(shù)將表達載體導入哺乳動物細胞中,表達出嵌合抗體
。
(5)為了進一步減少免疫排斥反應,科學家利用噬菌體展示庫技術(shù)生產(chǎn)出全人源化單抗(單抗成分全部由人的基因編碼)。具體操作如下,用PCR技術(shù)從生物體內(nèi)擴增出整套編碼人抗體的基因序列,克隆到噬菌體載體上,并以融合蛋白的形式表達到噬菌體表面,從而可以方便地對抗體進行篩選、擴增。但是利用這種方法制備的抗體結(jié)構(gòu)準確程度下降,原因是
抗體是在原核細胞內(nèi)表達,原核生物不能對真核生物的復雜蛋白進行準確加工
抗體是在原核細胞內(nèi)表達,原核生物不能對真核生物的復雜蛋白進行準確加工
。
【答案】機械;胰蛋白;95%空氣和5%的CO2;克隆化;抗原一抗體雜交;細胞培養(yǎng)液;抗原;大量制備;將異源單抗的輕、重鏈可變區(qū)基因插入含有人抗體恒定區(qū)的基因中,并構(gòu)建基因表達載體,利用顯微注射技術(shù)將表達載體導入哺乳動物細胞中,表達出嵌合抗體;抗體是在原核細胞內(nèi)表達,原核生物不能對真核生物的復雜蛋白進行準確加工
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:25引用:4難度:0.7
相似題
  • 1.回答下列(一)、(二)小題:
    (一)下面是某生物興趣小組同學配制的培養(yǎng)基,將馬鈴薯去皮切塊,加水煮沸一定時間,過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂,用水定容后滅菌,得到M培養(yǎng)基?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)在馬鈴薯浸出液中含有微生物生長所需的水、碳源、
     
    、生長因子等,向馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖的原因是
     
    。
    (2)若用M培養(yǎng)基分離酵母菌或霉菌,需要在培養(yǎng)基中加入青霉素,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,加入青霉素能分離酵母菌和霉菌的機理是
     
    。
    (3)若用M培養(yǎng)基分離土壤中能分解纖維素的微生物,需要用
     
    替代M培養(yǎng)基中的碳源,同時要加入剛果紅染料,已知剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物,但并不和纖維素水解后的生成物發(fā)生這種反應。接種土壤浸出液后,經(jīng)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以這些細菌為中心的透明圈,產(chǎn)生透明圈的原因是
     
    。
    (4)若用M培養(yǎng)基生產(chǎn)谷氨酸,需要調(diào)整培養(yǎng)基中的碳氮比,研究發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)基碳氮比為4:1時,菌體大量繁殖,谷氨酸積累
     
    ;當培養(yǎng)基碳氮比為3:1時,菌體繁殖受到抑制,谷氨酸產(chǎn)量則
     
    。
    (二)單克隆抗體被廣泛用作診斷試劑,在多種疾病的診斷和病原體鑒定中發(fā)揮重要的作用。如圖是單克隆抗體制備示意圖,結(jié)合相關(guān)知識回答下列問題:
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    (5)過程①加的促融劑是
     
    ,只考慮兩兩融合則①有
     
    種融合形式。
    (6)在HAT培養(yǎng)基中能生存的細胞是
     
    ,該培養(yǎng)基為
     
    。
    (7)過程③用96孔板培養(yǎng)和篩選雜交瘤細胞,具體方法是
     
    ,篩選的原理是
     
    ,篩選的結(jié)果是既能產(chǎn)生特異性抗體,又能無限繁殖的雜交瘤細胞。
    (8)單克隆抗體的最大優(yōu)點是
     
    (答出一點即可)。若制備能診斷新冠病毒的單克隆抗體診斷試劑盒,則注射抗原A為
     
    。
    發(fā)布:2024/9/12 4:0:8組卷:4引用:2難度:0.6
  • 2.常見的探針有核酸探針和蛋白質(zhì)探針。兩種探針結(jié)構(gòu)和功能均不相同,故而應用在不同的檢測中。而兩種探針的制備過程中所應用的技術(shù)也不相同。請回答下列問題。
    Ⅰ、蛋白質(zhì)探針的制備。
    (1)蛋白質(zhì)探針常用
     
    技術(shù)來制備。該技術(shù)的基本流程是將
     
    注射給實驗動物,獲取的脾細胞與骨髓瘤細胞融合后,用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對象。該篩選過程得到的雜交瘤細胞是產(chǎn)生
     
    的雜交瘤細胞,接下來要經(jīng)過
     
    檢測來獲得產(chǎn)生特定蛋白的雜交瘤細胞。最終將純化得到的特定蛋白結(jié)合上熒光或放射性標記,即為蛋白質(zhì)探針。
    (2)上述HAT培養(yǎng)基是
     
    (填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細胞后再檢測尋找產(chǎn)生特定目標蛋白的雜交瘤細胞,而不直接在脾細胞中尋找產(chǎn)生特定蛋白的B淋巴細胞的原因是
     
    。
    Ⅱ、不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結(jié)合上熒光或放射性標記,即為核酸探針。
    菁優(yōu)網(wǎng)
    (3)不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物,含量較多的被稱為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應的最初的若干次循環(huán)中,其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA),但當限制性引物消耗完后,就會產(chǎn)生大量的ssDNA。據(jù)下圖可知,最后大量獲得的ssDNA是圖中的
     
    (填“甲”或“乙”)鏈。
    (4)若反應最初有a個模板DNA分子,最初的6次循環(huán)擴增產(chǎn)生dsDNA,后10個循環(huán)均只擴增ssDNA,則需要限制性引物
     
    個。請繪制這16個循環(huán)中ssDNA的分子數(shù)量隨循環(huán)次數(shù)的變化圖2。(說明:縱軸的刻度請自行標注。)
    發(fā)布:2024/9/12 1:0:10組卷:1引用:1難度:0.5
  • 3.Graves?。℅D)可導致甲狀腺功能亢進。研究發(fā)現(xiàn),GD患者甲狀腺細胞表面表達大量細胞間黏附分子1(ICAM1),導致甲狀腺腫大??蒲腥藛T通過制備單克隆抗體,對治療GD進行了嘗試。
    (1)用ICAM1作為抗原間隔多次免疫若干只小鼠,幾周后取這些免疫小鼠的血清,分別加入多孔培養(yǎng)板的不同孔中,多孔培養(yǎng)板中需加入
     
    以檢測這些小鼠產(chǎn)生的抗體。依據(jù)反應結(jié)果,選出抗原—抗體反應最
     
    (填“強”或“弱”)的培養(yǎng)孔所對應的小鼠M。
    (2)取小鼠M的脾臟細胞制成細胞懸液,與實驗用骨髓瘤細胞進行融合,用選擇培養(yǎng)基篩選得到具有
     
    能力的細胞。核酸合成有兩個途徑,物質(zhì)A可以阻斷其中的全合成途徑(如圖)。正常細胞內(nèi)含有補救合成途徑所必需的轉(zhuǎn)化酶和激酶,制備單克隆抗體時選用的骨髓瘤細胞中缺乏轉(zhuǎn)化酶??捎眉尤際、A、T三種物質(zhì)的“HAT培養(yǎng)基”篩選出特定的雜交瘤細胞。
    菁優(yōu)網(wǎng)
    融合前將部分培養(yǎng)細胞置于含HAT的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng),一段時間后培養(yǎng)基中
     
    (填“有”或“無”)骨髓瘤細胞生長,說明培養(yǎng)基符合實驗要求。雜交瘤細胞可以在HAT培養(yǎng)基上大量增殖的原因是
     
    。
    (3)將獲得的上述細胞在多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng),用ICAM1檢測,從中選擇
     
    的雜交瘤細胞,將其植入小鼠腹腔中進行克隆培養(yǎng),一段時間后從小鼠腹水中提取實驗用抗體。
    發(fā)布:2024/9/25 5:0:1組卷:7引用:2難度:0.6
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