研究人員利用小鼠的單倍體ES細(xì)胞（只有一個染色體組），成功培育出轉(zhuǎn)基因小鼠。其主要技術(shù)流程如圖1所示，請分析回答下列問題：
（1）利用PCR技術(shù)可以擴增目的基因，PCR反應(yīng)體系中除含緩沖液、模板DNA、dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物以外，還應(yīng)含有 Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；引物應(yīng)選用圖2中的 A和DA和D（填圖中字母）。
（2）在基因工程操作步驟中，過程①②稱為 基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建。已知氨芐青霉素不能有效殺死小鼠細(xì)胞，而一定濃度的G418能有效殺死不具有Neor的小鼠細(xì)胞。結(jié)合圖1推測，過程①選用的2種限制酶是 Ⅰ和ⅡⅠ和Ⅱ（填圖中編號），③處的培養(yǎng)液應(yīng)添加 G418G418（填“氨芐青霉素”或“G418”）。
（3）細(xì)胞乙與 受精卵受精卵類似，圖1中桑葚胚需通過 胚胎移植胚胎移植技術(shù)移入代孕小鼠子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育，進(jìn)行該操作前需對受體小鼠進(jìn)行 同期發(fā)情同期發(fā)情處理。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；A和D；基因表達(dá)載體的構(gòu)建；Ⅰ和Ⅱ；G418；受精卵；胚胎移植；同期發(fā)情
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：2難度：0.7
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1．金茶花是中國特有的觀賞品種，但易得枯萎病?？茖W(xué)家在某種植物中找到了抗枯萎病的基因，通過如圖所示的方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品種。相關(guān)敘述不正確的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/12/31 3:0:2組卷：6引用：2難度：0.7 -
2．研究者擬構(gòu)建高效篩選系統(tǒng)，將改進(jìn)的苯丙氨酸合成關(guān)鍵酶基因P1導(dǎo)入谷氨酸棒桿菌，以提高苯丙氨酸產(chǎn)量。
（1）如圖是該高效篩選系統(tǒng)載體的構(gòu)建過程。載體1中含有KanR（卡那霉素抗性基因）和SacB兩個標(biāo)記基因，為去除篩選效率較低的SacB，應(yīng)選擇引物和，并在引物的（5′∕3′）端引入XhoⅠ酶識別序列，進(jìn)行PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)酶切、連接后環(huán)化成載體2。
（2）PCR擴增載體3中篩選效率較高的標(biāo)記基因RpsL（鏈霉素敏感基因）時，引物應(yīng)包含（EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ）酶識別序列，產(chǎn)物經(jīng)單酶切后連接到載體2構(gòu)建高效篩選載體4。
（3）將改進(jìn)的P1基因整合到載體4構(gòu)建載體5。將載體5導(dǎo)入鏈霉素不敏感（由RpsL突變造成）、卡那霉素敏感的受體菌。為獲得成功導(dǎo)入載體5的菌株，應(yīng)采用含有的平板進(jìn)行初步篩選。
（4）用一定的方法篩選出如下菌株：P1基因脫離載體5并整合到受體菌擬核DNA，且載體5上其他DNA片段全部丟失。該菌的表型為。
A．卡那霉素不敏感、鏈霉素敏感
B．卡那霉素敏感、鏈霉素不敏感
C．卡那霉素和鏈霉素都敏感
D．卡那霉素和鏈霉素都不敏感
（5）可采用技術(shù)鑒定成功整合P1基因的菌株。之后以發(fā)酵法檢測苯丙氨酸產(chǎn)量。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：227引用：5難度：0.5 -
3．Golden Gate是當(dāng)代極為重要的一種分子克隆技術(shù)，該技術(shù)的實施依賴于Ⅱs型限制酶，如圖所示為某種Ⅱs型限制酶的識別序列和切割位點（N表示任意堿基），以下說法正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:0:2組卷：50引用：3難度：0.7
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