人乳鐵蛋白是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白。乳鐵蛋白不僅參與鐵的轉(zhuǎn)運,而且具有廣譜抗菌抗氧化、抗癌、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等強大生物功能。如圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的過程。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因,ampR表示氨芐青霉素抗性基因,BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點。據(jù)圖回答:

(1)若用PCR技術(shù)擴增人乳鐵蛋白基因,其前提條件是有一段人乳鐵蛋白基因(目的基因)的核苷酸序列人乳鐵蛋白基因(目的基因)的核苷酸序列,以便合成相應(yīng)的引物,合成的引物能與待擴增區(qū)段兩端兩端(中間/兩端/左端/右端)的DNA序列彼此互補。
(2)圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體,需用HindⅢ和BamHIHindⅢ和BamHI限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。經(jīng)過兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)后再從DD處(填字母),挑出大腸桿菌擴增帶有外源DNA的重組載體。為使人乳鐵蛋白基因在牛的乳腺細胞中特異性表達,應(yīng)在基因的上游插入牛乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件牛乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件。
(3)過程②的代孕牛需要進行同期發(fā)情同期發(fā)情處理。若需獲得多頭轉(zhuǎn)基因??蓪υ缙谂咛ミM行分割,對囊胚進行分割時需要注意將內(nèi)細胞團均等分割將內(nèi)細胞團均等分割。
(4)為檢測轉(zhuǎn)基因牛的乳汁中是否含有人乳鐵蛋白,可采用抗原抗體雜交抗原抗體雜交技術(shù)。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】人乳鐵蛋白基因(目的基因)的核苷酸序列;兩端;HindⅢ和BamHI;氨芐青霉素;D;牛乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控組件;同期發(fā)情;將內(nèi)細胞團均等分割;抗原抗體雜交
【解答】
【點評】
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