Lon1蛋白酶具有降解葉綠體和線粒體內(nèi)氧化蛋白、維持細(xì)胞正常代謝的功能。為揭示控制Lon1蛋白酶表達(dá)的藍(lán)莓VcLon1基因的生物學(xué)功能，并為其他植物抗旱機(jī)制研究提供基礎(chǔ)信息。科研工作者通過(guò)獲得轉(zhuǎn)基因本氏煙植株來(lái)進(jìn)行干旱生理分析?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）為獲得VcLon1基因，科研人員用藍(lán)莓基因組DNA為模版，根據(jù)

VcLon1 基因的核苷酸序列

VcLon1 基因的核苷酸序列

設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增的原理是

DNA的復(fù)制

DNA的復(fù)制

。在進(jìn)行①過(guò)程時(shí)，選用兩種酶同時(shí)切割是為了防止一種酶切割時(shí)造成

目的基因與載體反向連接/自身連接

目的基因與載體反向連接/自身連接

。
（2）在進(jìn)行③過(guò)程時(shí)，需要用酒精溶液和

次氯酸鈉（或氯化汞）

次氯酸鈉（或氯化汞）

溶液進(jìn)行消毒，最后使用無(wú)菌水清洗。在④過(guò)程中使用的培養(yǎng)基中需加入一定量的蔗糖，作用是

提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓

提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓

（答出2點(diǎn)即可）。
（3）在⑤過(guò)程中，將本氏煙細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共培養(yǎng)，旨在讓目的基因進(jìn)入本氏煙細(xì)胞，影響該過(guò)程成功的因素，除溫度等環(huán)境因素外，還可能是

共培養(yǎng)時(shí)間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細(xì)胞的生理狀態(tài)等

共培養(yǎng)時(shí)間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細(xì)胞的生理狀態(tài)等

（答出2點(diǎn)即可）。除了本實(shí)驗(yàn)采用的方法，還可采用

電擊法、基因槍法、花粉管通道法等

電擊法、基因槍法、花粉管通道法等

法將VcLon1基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞。
（4）在⑦過(guò)程中，試管苗需要移栽至適宜的光照和溫度下，并逐漸

降低

降低

濕度進(jìn)行適應(yīng)鍛煉后方可移栽至自然環(huán)境中種植。
（5）科研人員經(jīng)過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因煙草植株1-10中

3

3

號(hào)植株未成功導(dǎo)入外源基因VcLon1，而WT植株則不能擴(kuò)增出2982bp條帶。隨后利用了半定量PCR分析外源基因VcLon1在本氏煙中的表達(dá)，其結(jié)果如圖2，因此后續(xù)可取

1、2、4、6-9

1、2、4、6-9

號(hào)轉(zhuǎn)基因本氏煙植株作為干旱生理分析的試驗(yàn)材料。