多不飽和脂肪酸（PUFAs）是人體必需脂肪酸，豬肉是我國(guó)最主要的肉類消費(fèi)品，提高其PUFAs含量對(duì)居民健康具有重要意義。為解決豬肉中PUFAs含量不足的問題，研究者從線蟲中獲得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育轉(zhuǎn)fat1基因豬，操作過程如圖1。
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增fat1基因時(shí)，應(yīng)在兩種引物的一端分別加上限制酶
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 BamHⅠ
BamHⅠ
識(shí)別與切割的序列。為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達(dá)載體一般選用兩種限制酶，選擇的原則是 B、D
B、D
。
A.目的基因編碼蛋白質(zhì)的序列中有兩種限制酶切割位點(diǎn)
B.表達(dá)載體內(nèi)，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
C.酶切后，目的基因兩端的黏性末端序列相同
D.酶切后，載體形成的兩個(gè)黏性末端序列不同
（2）圖1中的連接產(chǎn)物需先導(dǎo)入大腸菌中的原因是 連接產(chǎn)物為混合物，需先導(dǎo)入大腸菌篩選正確的重組表達(dá)載體，再導(dǎo)入豬成纖維細(xì)胞，以提高轉(zhuǎn)基因的成功率
連接產(chǎn)物為混合物，需先導(dǎo)入大腸菌篩選正確的重組表達(dá)載體，再導(dǎo)入豬成纖維細(xì)胞，以提高轉(zhuǎn)基因的成功率
；所構(gòu)建的重組基因表達(dá)載體中未標(biāo)注出的必需元件還有 復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因
復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因
。
（3）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染豬成纖維細(xì)胞，另設(shè)一組空白對(duì)照。48小時(shí)后于熒光顯微鏡下觀察到 轉(zhuǎn)染重組表達(dá)載體的豬成纖維細(xì)胞有綠色熒光，而空白對(duì)照組無綠色熒光
轉(zhuǎn)染重組表達(dá)載體的豬成纖維細(xì)胞有綠色熒光，而空白對(duì)照組無綠色熒光
，說明轉(zhuǎn)染成功。然后以轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為核供體構(gòu)建克隆胚胎，最終獲得轉(zhuǎn)fat1基因豬。
（4）研究者提取轉(zhuǎn)基因豬的基因組DNA，利用限制酶DraⅢ將其完全酶切并電泳分離。然后用探針通過 分子雜交
分子雜交
的方法，檢測(cè)fat1基因是否成功整合在豬基因組DNA中，酶切方式及檢測(cè)結(jié)果如圖2。
①轉(zhuǎn)基因豬1、2、3中分別被轉(zhuǎn)入了 1、2、1
1、2、1
個(gè)fat1基因。
②請(qǐng)解釋圖2檢測(cè)結(jié)果中4條雜交帶位置不同的原因：4個(gè)fat1基因插入在基因組中的位點(diǎn)不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置
4個(gè)fat1基因插入在基因組中的位點(diǎn)不同，酶切得到的含fat1基因的DNA片段大小不同，電泳分離后，其分布在凝膠的不同位置
。
③該實(shí)驗(yàn) 不能
不能
（填“能”或“不能”）說明成功培育轉(zhuǎn)基因豬，理由是 沒有檢測(cè)fat1基因是否成功表達(dá)；沒有在個(gè)體生物學(xué)水平鑒定轉(zhuǎn)基因豬的PUFAs
沒有檢測(cè)fat1基因是否成功表達(dá)；沒有在個(gè)體生物學(xué)水平鑒定轉(zhuǎn)基因豬的PUFAs
。
