TAT是一種短肽，可轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞。葩麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖體，使蛋白質(zhì)的合成受阻，從而引起細(xì)胞死亡?？蒲腥藛T以RTA作為抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性分子，利用TAT的作用，將TAT-RTA融合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入腫瘤細(xì)胞。如圖為獲得該融合蛋白的過程示意圖。
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回答下列問題。
（1）該基因工程的基本操作步驟是 TAT-RTA融合基因的篩選與獲取TAT-RTA融合基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將TAT-RTA融合基因?qū)胧荏w細(xì)胞、TAT-RTA融合基因的檢測(cè)與鑒定。
（2）利用PCR擴(kuò)增TAT-RTA融合基因，需要根據(jù)TAT和RTA基因設(shè)計(jì)引物，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。過程①中將PCR得到的TAT-RTA融合基因和質(zhì)粒經(jīng)過BamHⅠ/XboⅠ酶切后，用 DNA連接DNA連接酶連接。
（3）過程②中一般先用 Ca2+Ca2+處理大腸桿菌。培養(yǎng)一段時(shí)間后，從受體細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，可用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術(shù)檢測(cè)融合基因是否翻譯?？蒲腥藛T發(fā)現(xiàn)使用酵母菌比使用大腸桿菌作為受體細(xì)胞產(chǎn)生TAT-RTA融合蛋白的效果更好，原因可能是 酵母菌有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，能夠?qū)铣傻牡鞍踪|(zhì)進(jìn)行加工、修飾酵母菌有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，能夠?qū)铣傻牡鞍踪|(zhì)進(jìn)行加工、修飾。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】TAT-RTA融合基因的篩選與獲取；使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；DNA連接；Ca2+；抗原-抗體雜交；酵母菌有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器，能夠?qū)铣傻牡鞍踪|(zhì)進(jìn)行加工、修飾
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/9/25 5:0:1組卷：2引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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