自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中N₂的細(xì)菌，將玉米種子用自生固氮菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量。科研人員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖1?；卮鹣铝袉栴}：

（1）步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥赖脑蚴?

在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的固氮菌生長

在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的固氮菌生長

；步驟②需充分振蕩的主要目的是

使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中

使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中

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（2）下表為兩種培養(yǎng)基的配方，步驟④應(yīng)選其中的

Ashby

Ashby

培養(yǎng)基，原因是

該培養(yǎng)基不含氮源具有選擇作用，自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，LB培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有選擇作用

該培養(yǎng)基不含氮源具有選擇作用，自生固氮菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源，LB培養(yǎng)基中的蛋白胨可以提供氮源，不具有選擇作用

。

培養(yǎng)基類型	培養(yǎng)基組分
Ashby培養(yǎng)基	甘露醇（C6H14O6）、KH2PO4、MgSO4?7H2O、NaCl、K2SO4、CaCO3、蒸餾水、瓊脂
LB培養(yǎng)基	蛋白胨、酵母提取物、NaCl、蒸餾水、瓊脂

（3）步驟④所用的接種工具是

涂布器

涂布器

，若在④的平板上統(tǒng)計的菌落的平均數(shù)量為126個，則每克土壤中含有的固氮菌為

1.26×10⁷

1.26×10⁷

個。
（4）將純化的固氮菌置于完全培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)48小時，經(jīng)離心后收集下層細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至特定培養(yǎng)基中進(jìn)行固氮能力的測定，篩選出固氮能力最強(qiáng)的菌種CM12，為進(jìn)一步鑒定其固氮能力，科研人員選用發(fā)芽一致的玉米種子進(jìn)行3組盆栽實驗，30天后測定土壤微生物有機(jī)氮含量，結(jié)果如圖2。
注：CK：對照處理組；N：尿素處理組（每盆土壤中50mI.有氮全營養(yǎng)液：成分為在1000mL.無氮植物營養(yǎng)液中加入0.12g尿素）；CM12：自生固氮菌CM12處理組（每盆土壤澆50 mL，接種自身固氮菌的無氮植物營養(yǎng)液）。
①對照組（CK）的處理為

每盆土壤澆50mL無氮植物營養(yǎng)液

每盆土壤澆50mL無氮植物營養(yǎng)液

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②實驗結(jié)果表明：施用尿素處理和接種固氮菌CM12處理均能顯著增加土壤微生物有機(jī)氮含量。與尿素處理組相比，CM12處理組土壤微生物有機(jī)氮含量增加了約

83.3

83.3

%（保留1位小數(shù)）。
③自生固氨菌較共生固氮菌（如根瘤菌）的應(yīng)用范圍更廣，原因是

自生固氮菌能在土壤中獨立固氮，不受宿主的限制

自生固氮菌能在土壤中獨立固氮，不受宿主的限制

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