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PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為1.5kb(1kb=1000堿基對),利用大腸桿菌表達該蛋白。如圖為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。回答下列問題:
菁優(yōu)網(wǎng)
(1)為獲取phb2基因,提取該動物肝臟組織的總RNA,再經(jīng)
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程得到DNA,將其作為PCR反應的模板,并設計一對特異性引物來擴增目的基因。
(2)啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,能被
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別并結(jié)合,驅(qū)動基因的
轉(zhuǎn)錄
轉(zhuǎn)錄
;
(3)為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列)與載體正確連接,需在擴增的phb2基因兩端分別引入下列哪兩種不同限制酶的識別序列
A
A
(填選項)
A.EcoRⅠ和PvitⅡ
B.PvitⅡ和KpnⅠ
C.EcoRⅠ和KpnⅠ
(4)經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時,可選用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
(填“E.coli DNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)。
相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點(注:箭頭表示切割位點)
名稱 HindⅢ PvitⅡ KpnⅠ EcoRⅠ PstⅠ BamHⅠ
識別序列及切割位點 A↓AGCTT
TTCGA↑A
GAG↓CTG
GTC↑GAG
G↓GTACC
CCATG↑G
G↓AATTC
CTTAA↑G
CTGC↓AG
GA↑CGTC
G↓GATCC
CCTAG↑G
(5)轉(zhuǎn)化前需用CaCl2處理大腸桿菌細胞,使其處于
易接受外源DNA片段
易接受外源DNA片段
的生理狀態(tài),以提高轉(zhuǎn)化效率。
(6)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),隨機挑取菌落(分別編號為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,用(2)中選用的兩種限制酶進行酶切,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,結(jié)果如圖2,
2
2
號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒.

【答案】逆轉(zhuǎn)錄;RNA聚合酶;轉(zhuǎn)錄;A;T4DNA連接酶;易接受外源DNA片段;2
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:7引用:1難度:0.5
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  • 1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是(  )

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
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    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
  • 3.幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分,幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi),可增強其抗真菌病的能力?;卮鹣铝袉栴}:
    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括
     
     
    。
    (2)生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時,解開DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時,使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的
     
    。
    (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時,DNA連接酶催化形成的化學鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時,提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
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