PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因,研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),大小為1.5kb(1kb=1000堿基對),利用大腸桿菌表達該蛋白。如圖為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。回答下列問題:
(1)為獲取phb2基因,提取該動物肝臟組織的總RNA,再經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程得到DNA,將其作為PCR反應的模板,并設計一對特異性引物來擴增目的基因。
(2)啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,能被 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結(jié)合,驅(qū)動基因的 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄;
(3)為使phb2基因(該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列)與載體正確連接,需在擴增的phb2基因兩端分別引入下列哪兩種不同限制酶的識別序列 AA(填選項)
A.EcoRⅠ和PvitⅡ
B.PvitⅡ和KpnⅠ
C.EcoRⅠ和KpnⅠ
(4)經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時,可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶(填“E.coli DNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)。
相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點(注:箭頭表示切割位點)
名稱 | HindⅢ | PvitⅡ | KpnⅠ | EcoRⅠ | PstⅠ | BamHⅠ |
識別序列及切割位點 | A↓AGCTT TTCGA↑A |
GAG↓CTG GTC↑GAG |
G↓GTACC CCATG↑G |
G↓AATTC CTTAA↑G |
CTGC↓AG GA↑CGTC |
G↓GATCC CCTAG↑G |
易接受外源DNA片段
易接受外源DNA片段
的生理狀態(tài),以提高轉(zhuǎn)化效率。(6)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),隨機挑取菌落(分別編號為1、2、3、4)培養(yǎng)并提取質(zhì)粒,用(2)中選用的兩種限制酶進行酶切,酶切產(chǎn)物經(jīng)電泳分離,結(jié)果如圖2,
2
2
號菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒.【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;RNA聚合酶;轉(zhuǎn)錄;A;T4DNA連接酶;易接受外源DNA片段;2
【解答】
【點評】
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