牛的雄性胚胎中存在特異性的H-Y抗原,可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y單克隆抗體,篩選胚胎進行移植,以利用乳腺生物反應(yīng)器進行生物制藥。為研制H-Y單克隆抗體,某同學(xué)以小鼠甲為實驗材料設(shè)計了如圖實驗流程。請回答有關(guān)問題:
(1)轉(zhuǎn)基因動物通過分泌的乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品,稱為乳腺生物反應(yīng)器。將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動子啟動子等調(diào)控組件重組在一起,通過顯微注射顯微注射的方法,導(dǎo)入哺乳動物的受精卵受精卵中,然后使其生長發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動物。
(2)上述實驗前必須給小鼠甲注射H-Y抗原,該處理的目的是誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌H-Y抗體的B淋巴細胞誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌H-Y抗體的B淋巴細胞。
(3)實踐中常用聚乙二醇聚乙二醇作為促融劑,以提高細胞融合的成功率。
(4)寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟:取小鼠甲脾臟剪碎,用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞,加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液取小鼠甲脾臟剪碎,用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞,加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液。
(5)研究發(fā)現(xiàn),在小鼠細胞內(nèi)DNA的合成有兩條途徑,主要途徑(簡稱D途徑)是在細胞內(nèi)由氨基酸和其他小分子化合物合成核苷酸,進而合成DNA的過程,該過程中葉酸必不可少,氨基蝶呤是葉酸的拮抗劑,可以阻斷此途徑;另一輔助途徑(簡稱S途徑)是在次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情況下,經(jīng)酶的催化作用合成DNA,骨髓瘤細胞缺乏催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成的酶。
①圖中篩選1利用DNA合成途徑不同的特點配制的HAT培養(yǎng)基含有多種成分,其中添加的氨基蝶呤氨基蝶呤具有篩選雜交瘤細胞的作用。骨髓瘤細胞及其互相融合細胞不能在HAT培養(yǎng)基上增殖,其原因是缺乏催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸的酶缺乏催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸的酶。
②圖中篩選2含多次篩選,篩選所依據(jù)的基本原理是抗體與抗原特異性結(jié)合抗體與抗原特異性結(jié)合,篩選的目的是獲得能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細獲得能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細。
(6)通常選用囊胚期的早期胚胎做雌雄鑒別,鑒別后的雌性雌性胚胎符合要求,可做胚胎移植。
【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用.
【答案】啟動子;顯微注射;受精卵;誘導(dǎo)小鼠甲產(chǎn)生能夠分泌H-Y抗體的B淋巴細胞;聚乙二醇;取小鼠甲脾臟剪碎,用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞,加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液;氨基蝶呤;缺乏催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸的酶;抗體與抗原特異性結(jié)合;獲得能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細;雌性
【解答】
【點評】
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