羊絨素有“軟黃金”之稱，內(nèi)蒙古絨山羊和遼寧絨山羊是我國的兩大產(chǎn)絨品種．我國生物學(xué)家運(yùn)用現(xiàn)代生物技術(shù)培育出了轉(zhuǎn)基因絨山羊．其過程如圖1所示：

（1）在遼寧絨山羊細(xì)胞中獲取的IGF 一I基因在導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞之前須

構(gòu)建基因表達(dá)載體

構(gòu)建基因表達(dá)載體

，這是基因工程操作的核心步驟，若該過程使用的質(zhì)粒是雙鏈閉合環(huán)狀的DNA分子，用兩種識別序列不同的限制酶M和N切割（識別序列和切割位點(diǎn)如圖2），通過凝電泳分離分析得下表．

使用限制酶	酶切結(jié)果（單位：Kb）
酶M	1.0、5.0、10.0
酶M+酶N	1.0、2.0、3.0、4.0、5.0

（2）①在該質(zhì)粒中，N酶的切割位點(diǎn)有

2

2

個．
 ②M酶與N酶切出的能相互粘連的末端在酶的作用下相互連接，連接后的序列是否能用M酶、N酶進(jìn)行切割？

不能

不能

（填“能”或“不能”）．
（3）胚胎干細(xì)胞（ES）可由囊胚的

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

有分離培養(yǎng)獲得．轉(zhuǎn)基因胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)過程中應(yīng)定期

更換培養(yǎng)液

更換培養(yǎng)液

，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物對細(xì)胞自身造成危害．
（4）干細(xì)胞經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)誘導(dǎo)分化為早期胚胎，隨后即可植入經(jīng)

同期發(fā)情

同期發(fā)情

處理的代孕母羊體內(nèi)．