解磷菌是一種能將土壤中植物不能利用的磷轉(zhuǎn)化為植物可以利用磷的功能微生物（主要為細(xì)菌），在提高土壤中有效磷含量、促進(jìn)磷循環(huán)方面發(fā)揮著重要作用。解磷菌能分解含磷化合物使得菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈。如圖1為從某植物根際土壤中篩選出高效解磷菌的部分流程示意圖，步驟Ⅰ表示將1g土壤加入到100mL滅過(guò)菌的PVK培養(yǎng)基培養(yǎng)。36h后，取10mL培養(yǎng)液接種于100mL PVK培養(yǎng)基繼續(xù)富集培養(yǎng)；連續(xù)富集培養(yǎng)3次后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟Ⅱ-Ⅳ（B、C中培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分與A相同）。請(qǐng)據(jù)圖1回答：
（1）用于培養(yǎng)解磷菌的培養(yǎng)基在接種前需要通過(guò)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 法進(jìn)行滅菌。從成分上看，與A相比，B中多了凝固劑（瓊脂）凝固劑（瓊脂） （填物質(zhì)名稱）。
（2）在操作Ⅱ、Ⅲ中，采用的接種方法分別是稀釋涂布平板法、平板劃線法稀釋涂布平板法、平板劃線法。
（3）為了盡快觀察到解磷菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)將接種了樣品的平板倒置于恒溫箱恒溫箱中培養(yǎng)，并同時(shí)在另一平板上接種無(wú)菌水作為對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
（4）在固體培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)出解磷菌后，需通過(guò)測(cè)量透明圈和菌落透明圈和菌落直徑，比較它們的比值以確定其解磷能力從而篩選出目標(biāo)菌株。
（5）分離出的解磷菌，需通過(guò)分子鑒定以確定種屬關(guān)系。常用的方法是對(duì)細(xì)菌的核糖體RNA（16S-rRNA）所對(duì)應(yīng)的16S rDNA進(jìn)行序列分析（基因公司測(cè)序），在測(cè)序前一般采用菌落PCR的方法進(jìn)行擴(kuò)增。
①菌落PCR直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，與傳統(tǒng)PCR相比省時(shí)省力，其原因是不需要從細(xì)胞中提取目的基因或人工合成目的基因不需要從細(xì)胞中提取目的基因或人工合成目的基因。
②在PCR實(shí)驗(yàn)的具體操作時(shí)，按照事先設(shè)計(jì)好的配方用微量移液器微量移液器 向微量離心管中依次加入各組分，按照?qǐng)D2的設(shè)計(jì)設(shè)置好PCR程序，其中a表示預(yù)變性預(yù)變性。
③在進(jìn)行菌落PCR時(shí)，首先根據(jù)16SrDNA16SrDNA 兩端的脫氧核苷酸序列來(lái)設(shè)計(jì)引物。已知相關(guān)的上游引物序列為5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′，則下游引物的序列最合適的是bb。
a.5′-ACAATATGTATAATCT-3'
b.5′-TCATGAGCGCATAGTT-3'
c.5′-GCAATGCGTGCATTGC-3'
d.5′-AGAGGCTACGCATTGC-3'
【答案】高壓蒸汽滅菌；凝固劑（瓊脂）；稀釋涂布平板法、平板劃線法；恒溫箱；透明圈和菌落；不需要從細(xì)胞中提取目的基因或人工合成目的基因；微量移液器；預(yù)變性；16SrDNA；b
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：32引用：1難度：0.7
相似題
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1．回答下列關(guān)于微生物的問(wèn)題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹(shù)下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過(guò)程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測(cè)為真菌，則其特征中，最能說(shuō)明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對(duì)SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對(duì)不選用的其他培養(yǎng)液，分別說(shuō)明原因：
①缺少，SM01不能很好生長(zhǎng)
②具有，會(huì)影響對(duì)SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測(cè)定結(jié)果
③缺乏，會(huì)影響SM01的生長(zhǎng)，也無(wú)法對(duì)阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測(cè)定．
表 試驗(yàn)用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長(zhǎng)。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對(duì)其計(jì)數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問(wèn)題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長(zhǎng)規(guī)律，進(jìn)行了如下操作．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周?chē)鷧^(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過(guò)增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無(wú)菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長(zhǎng)通SO2的時(shí)間，同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長(zhǎng)規(guī)律：在計(jì)數(shù)時(shí)，計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計(jì)數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的；通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌，通常推測(cè)統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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