蛋白質(zhì)NLP是擬南芥細胞內(nèi)的硝酸鹽受體,與硝酸鹽結(jié)合后會激活硝酸鹽響應(yīng)基因的啟動子??蒲腥藛T通過構(gòu)建多種轉(zhuǎn)基因擬南芥研究NLP的功能,在NLP研究中利用硝酸鹽響應(yīng)基因的啟動子與熒光素酶基因組成報告基因。
(1)報告基因中添加熒光素酶基因的優(yōu)點是
熒光素酶基因表達產(chǎn)物可催化熒光素氧化發(fā)出熒光,易于檢測
熒光素酶基因表達產(chǎn)物可催化熒光素氧化發(fā)出熒光,易于檢測
。報告基因的受體擬南芥須為NLP合成突變型,以避免 細胞內(nèi)NLP
細胞內(nèi)NLP
對實驗的干擾。
(2)為獲得NLP的氨基端和羧基端以分別研究其功能,科研人員構(gòu)建了包含NLP片段的重組基因,如圖1所示,其中需要人為添加起始密碼子編碼序列的是 編碼羧基端的NLP基因片段
編碼羧基端的NLP基因片段
。若通過引物同時為NLP基因片段添加限制酶識別序列和起始密碼子編碼序列,起始密碼子編碼序列需添加在限制酶識別序列的 3'端
3'端
(填“3′端”或“5′端”或“3′端、5′端均可以”)。
(3)利用報告基因與上述三種重組NLP基因分別制備轉(zhuǎn)基因擬南芥,并編號為1組、2組、3組,與對照組分別置于含KCl或KNO3的培養(yǎng)基中培養(yǎng),實驗結(jié)果如圖2。對照組擬南芥的實驗處理是 導入報告基因,不導入重組NLP基因
導入報告基因,不導入重組NLP基因
。根據(jù)實驗結(jié)果可知激活硝酸鹽響應(yīng)基因表達的是 羧基端
羧基端
(填“氨基端”或“羧基端”或“氨基端、羧基端均可以”);硝酸鹽存在時,NLP激活硝酸鹽響應(yīng)基因表達的機制是 NLP的氨基端會抑制羧基端的激活作用,硝酸鹽能夠解除抑制作用
NLP的氨基端會抑制羧基端的激活作用,硝酸鹽能夠解除抑制作用
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