人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn)，neor為新霉素抗性基因，BLC基因?yàn)棣?乳球蛋白基因，GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細(xì)胞總RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNAcDNA，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因?yàn)?hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)），在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEBL質(zhì)粒中。
（2）過程③中pEBL質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)進(jìn)入山羊乳腺上皮細(xì)胞依據(jù)的原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入了 pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒）pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒）的細(xì)胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞，觀察到 無綠色熒光無綠色熒光現(xiàn)象即為轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術(shù)檢測受體細(xì)胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAhLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，還可以用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術(shù)，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流動性；pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒（或普通質(zhì)粒或重組質(zhì)粒）；無綠色熒光；hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA；抗原-抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7