新型冠狀病毒的檢測方法很多,實(shí)時(shí)熒光RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))法是目前核酸檢測的主要方法,操作流程:采集樣本→提取RNA→逆轉(zhuǎn)錄成cDNA→PCR擴(kuò)增→結(jié)果分析。如圖是RT-PCR兩步法的過程圖,在PCR擴(kuò)增時(shí)加入能與目的基因(新冠病毒的核殼蛋白N基因)結(jié)合的熒光探針。目的基因合成越多,熒光信號(hào)越強(qiáng),回答下列問題。
(1)構(gòu)建cDNA文庫時(shí),會(huì)利用 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA 連接限制性核酸內(nèi)切酶、DNA 連接酶,將cDNA斷開并與載體結(jié)合,然后把各個(gè)片段 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化到一個(gè)受體菌群中儲(chǔ)存。cDNA文庫構(gòu)建的意義有 能從文庫中篩選獲取目的基因、物種的分子保存等能從文庫中篩選獲取目的基因、物種的分子保存等(回答1點(diǎn))。
(2)在配置PCR擴(kuò)增液時(shí),加入的熒光探針序列:5′-TTGCT……AGATT-3′,如果模板中存在N基因序列,與探針結(jié)合的序列應(yīng)該是5′-AATCT…AGCAAAATCT…AGCAA-3′。如果某人沒有感染新冠病毒,則PCR時(shí)DNA實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度 不變不變(增強(qiáng)/減弱/不變)。
(3)我國前不久推出新冠病毒抗原檢測的方法,相較核酸檢測,方便簡單,出結(jié)果較快,其原理是 抗原與抗體特異性結(jié)合抗原與抗體特異性結(jié)合,目前國家推廣“抗原篩查,核酸診斷”的監(jiān)測模式,如果取樣中所含病原體數(shù)量較少時(shí),核酸檢測的優(yōu)點(diǎn)是 如果取樣中所含病原體數(shù)量較少時(shí),抗原檢測很難測出,而核酸檢測有擴(kuò)增環(huán)節(jié),對(duì)病原體檢測靈敏如果取樣中所含病原體數(shù)量較少時(shí),抗原檢測很難測出,而核酸檢測有擴(kuò)增環(huán)節(jié),對(duì)病原體檢測靈敏。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】限制性核酸內(nèi)切酶、DNA 連接;轉(zhuǎn)化;能從文庫中篩選獲取目的基因、物種的分子保存等;AATCT…AGCAA;不變;抗原與抗體特異性結(jié)合;如果取樣中所含病原體數(shù)量較少時(shí),抗原檢測很難測出,而核酸檢測有擴(kuò)增環(huán)節(jié),對(duì)病原體檢測靈敏
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:32引用:1難度:0.6
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1.數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù),其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是( ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:6引用:2難度:0.6 -
2.PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因,還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR,其操作步驟為:
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物,得到兩個(gè)常規(guī)引物,分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物;
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物,突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物;
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增,得到突變目的基因序列。回答下列問題:
(1)PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān),DNA中G+C的含量越多,要求的變性溫度越高。其原因是
(2)在第一次PCR反應(yīng)中,形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過
(3)如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物,其步驟包括:發(fā)布:2024/12/30 23:0:2組卷:32引用:3難度:0.6 -
3.下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:3引用:3難度:0.7
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