番木瓜極易受環(huán)斑病毒（PRSV，單鏈RNA病毒）侵襲。上世紀(jì)番木瓜環(huán)斑病在我國(guó)爆發(fā)，導(dǎo)致番木瓜嚴(yán)重減產(chǎn)。2006年，轉(zhuǎn)基因番木瓜獲得農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的安全證書，這是我國(guó)第一例獲準(zhǔn)進(jìn)行商品化種植的轉(zhuǎn)基因果樹。
（1）最初的轉(zhuǎn)基因番木瓜品種“Rainbow”是以PRSV的衣殼蛋白（CP）基因作為目的基因。通過 逆轉(zhuǎn)錄和PCR/RTPCR/逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄和PCR/RTPCR/逆轉(zhuǎn)錄過程從PRSV基因組中獲取CP基因，經(jīng)限制酶和 DNA連接DNA連接酶處理，構(gòu)建基因表達(dá)載體，用 花粉管通道/農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化/基因槍花粉管通道/農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化/基因槍法導(dǎo)入番木瓜愈傷組織中，培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因番木瓜植株。
（2）病毒自身基因作為番木瓜抗性基因的機(jī)理源于一種名為RNAi的基因沉默機(jī)制（圖1）。轉(zhuǎn)入番木瓜細(xì)胞內(nèi)的CP基因轉(zhuǎn)錄出CP mRNA。PRSV侵染番木瓜后，病毒RNA會(huì)與CP mRNA通過 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合形成雙鏈RNA。D酶與該雙鏈RNA結(jié)合，經(jīng)復(fù)雜過程形成RISC復(fù)合物，最終阻礙病毒RNA在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行 RNA復(fù)制和指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成RNA復(fù)制和指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而抑制病毒增殖，體現(xiàn)抗病性。
（3）“Rainbow”對(duì)夏威夷的PRSV（HA株系）具有良好的抗性，但對(duì)我國(guó)的PRSV（YS等株系）抗性不強(qiáng)。中國(guó)科學(xué)家以PRSV的RNA復(fù)制酶基因（RP）為目的基因，成功培育出具有廣譜抗性的“華農(nóng)1號(hào)”抗病毒番木瓜新品種。請(qǐng)推測(cè)“Rainbow”對(duì)我國(guó)PRSV抗性不強(qiáng)而“華農(nóng)1號(hào)”具有廣譜抗性的原因 不同株系間CP基因序列差異較大導(dǎo)致Rainbow對(duì)我國(guó)PRSV抗性不強(qiáng)。PSRV的RP基因序列可能比CP基因更加保守（不同株系的RP基因序列相同），作為目的基因?qū)敕竟虾?，具有廣泛的病毒株系抗性不同株系間CP基因序列差異較大導(dǎo)致Rainbow對(duì)我國(guó)PRSV抗性不強(qiáng)。PSRV的RP基因序列可能比CP基因更加保守（不同株系的RP基因序列相同），作為目的基因?qū)敕竟虾螅哂袕V泛的病毒株系抗性。
（4）上述轉(zhuǎn)基因番木瓜對(duì)PRSV的抗性僅有20%。為使番木瓜具有更高效的抗PRSV能力，我國(guó)科研人員設(shè)計(jì)引物向RP基因兩端引入兩個(gè)酶切位點(diǎn)，并和中間載體1連接構(gòu)建中間載體2，利用同樣的方法構(gòu)建出中間載體3（圖2）。最后用限制酶將融合基因從中間載體3上切下，構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入番木瓜中。
請(qǐng)?jiān)趫D2的①、②、③處寫出恰當(dāng)?shù)南拗泼?BglⅡ、SalⅠ、BamHⅠBglⅡ、SalⅠ、BamHⅠ。結(jié)合圖1、圖2闡述利用該過程構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因番木瓜比直接導(dǎo)入RP基因的轉(zhuǎn)基因番木瓜抗病毒效果更好的機(jī)理 融合基因中兩段RP基因轉(zhuǎn)錄出的RNA互補(bǔ)配對(duì)，mRNA內(nèi)部形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)（融合基因中正向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA和反向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)）融合基因中兩段RP基因轉(zhuǎn)錄出的RNA互補(bǔ)配對(duì)，mRNA內(nèi)部形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)（融合基因中正向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA和反向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)）。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄和PCR/RTPCR/逆轉(zhuǎn)錄；DNA連接；花粉管通道/農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化/基因槍；堿基互補(bǔ)配對(duì)；RNA復(fù)制和指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成；不同株系間CP基因序列差異較大導(dǎo)致Rainbow對(duì)我國(guó)PRSV抗性不強(qiáng)。PSRV的RP基因序列可能比CP基因更加保守（不同株系的RP基因序列相同），作為目的基因?qū)敕竟虾?，具有廣泛的病毒株系抗性；BglⅡ、SalⅠ、BamHⅠ；融合基因中兩段RP基因轉(zhuǎn)錄出的RNA互補(bǔ)配對(duì)，mRNA內(nèi)部形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)（融合基因中正向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA和反向連接的RP基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)RNA沉默機(jī)制啟動(dòng)）
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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