癌癥的顯著特征是癌細胞在一個組織或器官中的惡性增殖。但超過99%由癌癥導致死亡的案例并不是因為原發(fā)性腫瘤，而是因為轉移瘤。一些癌細胞會從原發(fā)性腫瘤上脫落，這些癌細胞具備轉移和入侵能力，它們會進入人體的血液和淋巴系統(tǒng)，形成循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）。它們可單獨移動或組成小團抵達其他器官（如骨髓、肝臟、肺和大腦等），并在那里形成轉移瘤。傳統(tǒng)影像學診斷方式在發(fā)現轉移瘤形成時往往已延誤最佳治療時機。而通過液體活檢，即檢測血液中存在的CTCs,有助于早期轉移腫瘤患者的診斷、監(jiān)測術后患者腫瘤的復發(fā)與轉移。請分析并回答下列相關問題。
（1）CTCs表面的蛋白質與正常細胞相比，通常會出現明顯改變，例如

糖蛋白減少

糖蛋白減少

，從而導致其具有轉移的特性。研究人員比較了上皮組織細胞來源的CTCs與正常白細胞相比，表面蛋白質的一些改變，如表：
表 細胞表面抗原標志物表達差異

分類	CD45	EpCAM
白細胞	+++	-
CTCs	-	+++

造成CTCs與正常白細胞細胞表面抗原標志物表達差異的根本原因主要是

原癌基因和抑癌基因

原癌基因和抑癌基因

發(fā)生突變，導致細胞的畸形分化。
（2）在臨床診斷中，常利用一種稱為Cellsearch的方法，對被測人進行血液檢測，對是否存在癌癥轉移的情況進行診斷，方法如下：
①單克隆抗體的制備（流程如圖）

a.首先用CD45蛋白免疫小鼠，然后經過①、②、③、④這幾個關鍵步驟，首先獲得大量單克隆抗體A；再用

EpCAM病毒表面的蛋白（如某些糖蛋白和酶）

EpCAM病毒表面的蛋白（如某些糖蛋白和酶）

免疫小鼠，經過相同的步驟獲得單克隆抗體B。步驟①常常用與植物原生質體融合不同的方法如用滅活的病毒促融，其原理是

滅活的病毒與細胞膜蛋白發(fā)生相互作用

滅活的病毒與細胞膜蛋白發(fā)生相互作用

，從而使細胞相互凝聚。
b.步驟②通常使用選擇培養(yǎng)基，主要目的是篩選出

雜交瘤細胞

雜交瘤細胞

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c.步驟③主要需要經過

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測

克隆化培養(yǎng)和抗體檢測

的兩項操作，并經過多次篩選，最終獲得

能分泌所需抗體的雜交瘤細胞

能分泌所需抗體的雜交瘤細胞

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d.步驟④是大規(guī)模培養(yǎng)，主要有兩種方式：

體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖

體外大規(guī)模培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內增殖

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②免疫磁珠分離：取待測人員少量血液（一般7.5m1即可）于采集管內，將與

單克隆抗體A

單克隆抗體A

相連的磁珠加入采集管，外加磁場使磁珠定向移動到指定區(qū)域并取出，排除非腫瘤細胞干擾（負性篩選）；再將與

單克隆抗體B

單克隆抗體B

相連的磁珠加入采集管，外加磁場使磁珠定向移動到指定區(qū)域取出，收集CTCs（陽性富集）。
③對收集到的細胞進行計數并做出診斷，若出現

CTCs陽性細胞計數

CTCs陽性細胞計數

超出正常范圍，即可診斷發(fā)生癌細胞轉移。
（3）Cellsearch具有比傳統(tǒng)檢測方式更早發(fā)現問題，特異性強、靈敏度高且需要血液量少等優(yōu)勢，但該系統(tǒng)在臨床上卻未得到充分的利用，請從以上內容中尋找線索，推測原因：

單克隆抗體制備成本高；不同來源CTC具有不同表面抗原，診斷方式具有局限性等

單克隆抗體制備成本高；不同來源CTC具有不同表面抗原，診斷方式具有局限性等

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