白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因）是重要的免疫應(yīng)答基因?？蒲腥藛T克隆SLA-2基因，構(gòu)建該基因的表達(dá)載體，進(jìn)而獲得該基因優(yōu)勢(shì)表達(dá)的豬腎上皮細(xì)胞。該實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1（已知SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切割位點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離）。其中四種限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如表，回答下列問題：

限制酶	BclⅠ	NotⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	T↓GATCA	GC↓GGCCGC	T↓CTAGA	↓GATC

（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2基因的原理是

DNA（半保留）復(fù)制

DNA（半保留）復(fù)制

，為了使擴(kuò)增的SLA-2基因與質(zhì)粒連接，需要在引物的

5'

5'

（填3或5）端加上

NotI、XbaI

NotI、XbaI

限制酶識(shí)別序列。擴(kuò)增結(jié)束后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物中除目的基因外，還有其他不同大小片段的非目的基因，可能的原因一般有以下哪些

①③

①③

（填序號(hào)）。
①模板受到污染
②復(fù)性溫度過高
③引物太短
④延伸溫度偏低
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是

擴(kuò)增重組DNA分子

擴(kuò)增重組DNA分子

，該過程需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后將大腸桿菌涂布在含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后進(jìn)行電泳，依據(jù)圖2，在圖2上畫出可能得到的電泳條帶，同時(shí)在右側(cè)標(biāo)出DNA片段長(zhǎng)度

。
（4）科研中，一般利用最小致死濃度（使某種細(xì)胞全部死亡的最小濃度）的嘌呤霉素溶液處理以初步篩選轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞。為確定初步篩選轉(zhuǎn)化豬腎上皮細(xì)胞的最小致死嘌呤霉素濃度，科研人員利用

未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮

未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮

細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖3。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)使用濃度為

80ug/mL

80ug/mL

的嘌呤霉素溶液初步篩選轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞，理由是

80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞（沒有抗嘌呤霉素的細(xì)胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長(zhǎng)的即為已轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞（有抗嘌呤霉素的細(xì)胞）

80ug/mL的嘌呤霉素溶液濃度是使未轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞（沒有抗嘌呤霉素的細(xì)胞）全部死亡的最小濃度，能存活生長(zhǎng)的即為已轉(zhuǎn)化的豬腎上皮細(xì)胞（有抗嘌呤霉素的細(xì)胞）

。