亞麻酸（ALA）能夠促進(jìn)卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育。為了給水牛體外胚胎產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)中合理使用亞麻酸提供理論依據(jù)，科研人員研究了不同濃度的亞麻酸對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟、早期胚胎發(fā)育的影響。分析回答：
①卵母細(xì)胞的收集和體外培養(yǎng)：從屠宰場(chǎng)水牛的卵巢中收集并處理卵母細(xì)胞，隨機(jī)分成5組，分別置于不同濃度亞麻酸的培養(yǎng)液中，在39℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)22～24h。
②卵母細(xì)胞成熟判斷：在顯微鏡下觀察卵母細(xì)胞，判斷其是否成熟，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1。
③體外受精：在受精溶液中進(jìn)行體外受精后，用顯微鏡觀察判斷是否完成受精。
④早期胚胎培養(yǎng)：將受精卵移入胚胎培養(yǎng)液中培養(yǎng)44～48h后檢查分裂情況，每隔48h更換一次培養(yǎng)液，第5～9天觀察囊胚發(fā)育情況，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表2。
表1亞麻酸對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響
| ALA濃度/μmol?L-1 |
卵母細(xì)胞數(shù) |
核成熟卵子數(shù) |
| 0 |
229 |
137 |
| 10 |
201 |
133 |
| 50 |
227 |
166 |
| 100 |
215 |
137 |
| 200 |
215 |
135 |
表2亞麻酸對(duì)水牛早期胚胎發(fā)育的影響
| ALA濃度/μmol?L-1 |
培養(yǎng)卵數(shù) |
分裂數(shù) |
囊胚數(shù) |
| 0 |
309 |
171 |
75 |
| 10 |
325 |
182 |
82 |
| 50 |
292 |
185 |
97 |
| 100 |
310 |
188 |
84 |
| 200 |
231 |
145 |
68 |
（1）步驟①中，細(xì)胞培養(yǎng)箱中加5%CO
2 的作用是
維持培養(yǎng)液的pH
維持培養(yǎng)液的pH
。
（2）步驟②中，成熟卵母細(xì)胞才可以進(jìn)行受精，此時(shí)其細(xì)胞內(nèi)染色體的行為特征是
染色體的著絲點(diǎn)排列在赤道板上
染色體的著絲點(diǎn)排列在赤道板上
。步驟③中，判斷是否受精的依據(jù)是
在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可否觀察到兩個(gè)極體
在卵細(xì)胞膜和透明帶的間隙可否觀察到兩個(gè)極體
。
（3）步驟④中，具32個(gè)細(xì)胞的胚胎發(fā)育時(shí)期是
桑葚胚期
桑葚胚期
，培養(yǎng)過(guò)程定期更換培養(yǎng)液的目的是
清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
。
（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，亞麻酸溶液為200μmol?L
-1 時(shí)，對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育起
促進(jìn)
促進(jìn)
作用。
（5）本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，
50
50
μmol?L
-1的亞麻酸對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟和囊胚發(fā)育都較有利，其判斷依據(jù)是
核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例較高，囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例較高
核成熟卵子數(shù)占卵母細(xì)胞的比例較高，囊胚數(shù)占培養(yǎng)卵數(shù)的比例較高
。
