馬鈴薯是我國重要的糧食作物之一，致病疫霉導(dǎo)致的晚疫病及干旱、高低溫和鹽脅迫等是導(dǎo)致其減產(chǎn)的重要原因。研究人員為探究StNPR4和StproNPR4基因在馬鈴薯應(yīng)對生物脅迫和非生物脅迫中的功能進(jìn)行了相關(guān)實驗，基因表達(dá)載體構(gòu)建示意圖如圖。

回答下列問題：
（1）用SacⅡ等限制酶切割含目的基因的DNA片段，與經(jīng)相同酶切割后的pENTR-L16質(zhì)粒用

DNA連接

DNA連接

酶連接，構(gòu)建重組pENTR-L16。
（2）經(jīng)

SacII和Kpn1

SacII和Kpn1

酶將含目的基因的片段切出并連接到載體pOREO4上構(gòu)建重組pOREO4。
（3）經(jīng)

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法將重組pOREO4導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，得到5個轉(zhuǎn)化品系，命名為1、2、3、4和5。
A.馬鈴薯基因相對表達(dá)量分析；B.馬鈴薯接種致病疫霉后病原菌相對生物量分析；C.150mmol?L^-1的NaCl處理對馬鈴薯快繁生根率的影響；**表示組別間差異達(dá)到極顯著水平
（4）①通過

分子雜交技術(shù)（PCR技術(shù)）

分子雜交技術(shù)（PCR技術(shù)）

等技術(shù)，檢測

轉(zhuǎn)基因不同品系

轉(zhuǎn)基因不同品系

的目的基因轉(zhuǎn)錄水平。據(jù)圖A分析，只有轉(zhuǎn)基因品系

5

5

的表達(dá)量顯著低于野生型（WT）和其余4個轉(zhuǎn)化品系，因此后續(xù)試驗不再檢測此品系。②據(jù)圖B和圖C分析：這樣的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯的表達(dá)策略優(yōu)勢是

具有抗病性，致病疫霉相對生物量低；生根率高，存活能力強(qiáng)

具有抗病性，致病疫霉相對生物量低；生根率高，存活能力強(qiáng)

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