科學(xué)家研究嗜熱土壤芽孢桿菌得出這種桿菌能產(chǎn)生β葡萄糖苷酶（BglB），這是一種耐熱纖維素酶，為了在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗，依題回答下列問題。
Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶
（1）PCR擴(kuò)增BglB基因時，需要的條件有 目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶（至少答3點）。
（2）如圖1為質(zhì)粒限制酶切圖譜。BglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴(kuò)增的BglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的BglB基因兩端需分別引入 NdeINdeI和 BamHIBamHI限制酶的識別序列。
（3）大腸桿菌不能降解纖維素，原因是 不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為 轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶。
Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響
（4）據(jù)圖2、3可知，80℃保溫時間達(dá)到 3030分鐘后，BglB酶會失活；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在 BB（單選）。
A．50℃
B．60℃
C．70℃
D．80℃
注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時間后通過其活性的保持程度來反映的
Ⅲ.鑒定篩選出的大腸桿菌菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒
（5）為鑒定篩選出的大腸桿菌菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計引物進(jìn)行PCR鑒定。圖4所示甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中相應(yīng)位置，PCR鑒定時應(yīng)選擇的一對引物是 乙和丙乙和丙。某學(xué)生嘗試用圖中另外一對引物，結(jié)果從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增了400bp片段，原因是 目的基因反向連接目的基因反向連接。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】目的基因、四種游離的脫氧核苷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶；NdeI；BamHI；不能產(chǎn)生分解纖維素的有關(guān)酶；轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌合成出有活性的BglB酶；30；B；乙和丙；目的基因反向連接
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/8 8:0:10組卷：2引用：2難度：0.6
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