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2019年底，新冠肺炎在我國大面積流行。病原體為一種新型RNA冠狀病毒，即2019-nCoV?？蒲腥藛T以病毒表面S蛋白作為主要的病毒抗原，擬利用基因工程研制新冠病毒重組蛋白疫苗用于接種預(yù)防。圖1表示病毒S蛋白的基因，圖2表示取自真菌細胞的質(zhì)粒PcMV及其上部分限制酶切位點，圖3表示疫苗制作的簡要操作流程。
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（1）圖3中步驟①所需要的酶和原料是
逆轉(zhuǎn)錄酶和四種脫氧核苷酸
逆轉(zhuǎn)錄酶和四種脫氧核苷酸
。步驟②需要的酶是限制酶和
DNA連接酶
DNA連接酶
。
（2）圖1中不能選擇EcoRI和AccI兩種限制酶切割S蛋白基因，原因是
這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性
這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性
。現(xiàn)在科研人員已經(jīng)可以根據(jù)需要在目的基因兩端添加需要的限制酶切割位點序列，但是一般不在目的基因的兩端添加同一種酶切位點，原因是
防止目的基因（S蛋白基因）自身連接或反向連接在質(zhì)粒上
防止目的基因（S蛋白基因）自身連接或反向連接在質(zhì)粒上
。若選擇兩種酶且位點序列添加在S蛋白基因的左右兩端（考慮轉(zhuǎn)錄的方向）應(yīng)分別選擇
ApaⅠ和SolⅠ
ApaⅠ和SolⅠ
。
（3）PcMV質(zhì)粒上氨芐青霉素抗性基因的作用是
篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞
篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞
。
（4）將表達載體導入動物細胞中進行培養(yǎng)的原因是
PcMV質(zhì)粒取自真菌，屬真核細胞，導入動物細胞中易于基因的表達
PcMV質(zhì)粒取自真菌，屬真核細胞，導入動物細胞中易于基因的表達
。為了檢驗表達的S蛋白是否與病毒S蛋白有相同的免疫反應(yīng)特性，可用S蛋白與新冠病毒肺炎康復患者血清進行
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
實驗，進行檢測。

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和四種脫氧核苷酸；DNA連接酶；這兩種酶在S蛋白基因上有切割位點會破壞S蛋白基因的完整性；防止目的基因（S蛋白基因）自身連接或反向連接在質(zhì)粒上；ApaⅠ和SolⅠ；篩選和檢測表達載體是否導入受體細胞；PcMV質(zhì)粒取自真菌，屬真核細胞，導入動物細胞中易于基因的表達；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：2難度：0.6
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  • 1．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應(yīng)器。研究人員利用基因工程技術(shù)構(gòu)建TI基因的表達載體，并將其導入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗?；卮鹣铝袉栴}：
    （1）研究人員利用PCR技術(shù)特異性地擴增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關(guān)重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構(gòu)建基因表達載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構(gòu)建成功的基因表達載體應(yīng)含有的結(jié)構(gòu)有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結(jié)構(gòu)。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關(guān)步驟和實驗結(jié)果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實驗結(jié)果說明
     
    。
    組別 實驗步驟 實驗結(jié)果
    ① ② ③
    轉(zhuǎn)基因鹽藻（A組） 離心收集三組細
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉(zhuǎn)基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 菁優(yōu)網(wǎng)2．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在
     
    μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應(yīng)采用
     
    技術(shù)。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 3．我國科學家利用蘇云金桿菌中的Bt基因培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，下列說法錯誤的是（　?。?/h2>

    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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