蜂毒肽又稱蜂毒溶血肽，是蜂毒的主要活性成分之一，在抗菌、消炎、抗腫瘤乃至肌肉再生等方面具有一定應(yīng)用價(jià)值。蜂毒前溶血肱原是prepromelittin基因（以下簡(jiǎn)稱PL基因）的表達(dá)產(chǎn)物，在蜜蜂體內(nèi)合成后首先加工成蜂毒溶血肽原（蜂毒肽前體蛋白），其可被進(jìn)一步水解而形成蜂毒肽。與蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有較大的溶解度，且對(duì)細(xì)胞的破壞能力小，可以考慮利用基因工程方法在體外合成蜂毒肽的前體產(chǎn)物。
（1）生產(chǎn)蜂毒肽常選用微生物做受體細(xì)胞，優(yōu)點(diǎn)是
微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)繁殖快、對(duì)環(huán)境因素敏感和容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作
微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)繁殖快、對(duì)環(huán)境因素敏感和容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作
；通過(guò)原核細(xì)胞 不能
不能
（填“能”或“不能”）直接獲得蜂毒肽嗎，原因是 原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工
原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工
。
（2）為了解決（1）中的問(wèn)題，對(duì)蜂毒前溶血肽原基因進(jìn)行改造（如圖1），以便于后期用羥胺（一種能專一性裂解特定兩個(gè)氨基酸之間肽鍵的化合物）對(duì)生產(chǎn)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行裂解獲得蜂毒肽。觀察圖1可知，改造后的DNA序列長(zhǎng)度為 213
213
bp,根據(jù)改造前后氨基酸序列的變化推測(cè)羥胺的識(shí)別位點(diǎn)是 Asn-Gly
Asn-Gly
，獲得該位點(diǎn)操作是 在蜂毒肽對(duì)應(yīng)的核酸序列前加入AAC，使其表達(dá)Asn從而形成Asn?Gly位點(diǎn)
在蜂毒肽對(duì)應(yīng)的核酸序列前加入AAC，使其表達(dá)Asn從而形成Asn?Gly位點(diǎn)
。除此之外，與原DNA序列相比，改造后的序列中刪除了Gly的對(duì)應(yīng)序列 GGT
GGT
，推測(cè)刪除的理由是 蜂毒肽末端沒(méi)有Gly
蜂毒肽末端沒(méi)有Gly
。
注；圖中所示的“原DNA序列”為蜂毒前溶血肽原的編碼區(qū)序列的編碼鏈，即轉(zhuǎn)錄時(shí)所用模板鏈的互補(bǔ)鏈。①甲硫氨酸，縮寫為M，由起始密碼子AUG編碼；②丙氨酸（Asn），縮寫為N；③甘氨酸（Gly），縮寫為G，由密碼子GGU、GGC、GGA、GGG編碼。
（3）根據(jù)改造后的基因序列，利用人工化學(xué)合成方法進(jìn)行全基因合成，設(shè)計(jì)并合成引物對(duì)合成基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物和pGEX-4T-1載體利用 EcoRI、SalI和DNA連接
EcoRI、SalI和DNA連接
酶進(jìn)行基因表示載體的構(gòu)建，獲得蜂毒前溶血肽原與GST（一種標(biāo)簽蛋白）融合表達(dá)重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/PPMel（見(jiàn)圖2）。已知擴(kuò)增PL基因時(shí)設(shè)計(jì)的一條引物的序列是：引物M1：5′-GACACGAATTC-3′，已知EcoRⅠ的識(shí)別序列是GAATTC，請(qǐng)續(xù)寫出該引物的后8個(gè)堿基 5'-ATGAAATT-3'
5'-ATGAAATT-3'
。
