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草甘膦是一種非選擇性除草劑,殺死雜草的同時(shí)也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)結(jié)構(gòu)相似,可與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶,阻止PEP轉(zhuǎn)化,影響植物細(xì)胞正常代謝。我國(guó)科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的微生物體內(nèi)獲取草甘膦抗性基因GR29,并將其導(dǎo)入大豆體細(xì)胞中獲得抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因大豆。
(1)結(jié)合上述信息推測(cè)GR29發(fā)揮抗草甘膦作用的途徑可能是
GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶
GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶

(2)將GR29導(dǎo)入大豆細(xì)胞前,需將其與酶切后的質(zhì)粒P連接獲得
重組質(zhì)粒
重組質(zhì)粒
。因GR29基因序列兩端無(wú)所需的限制酶切位點(diǎn),據(jù)圖1推測(cè)擴(kuò)增該基因時(shí)需向引物1和引物2的
5'端
5'端
(5'端/3'端)加上
PstI和XhoI
PstI和XhoI
限制酶的識(shí)別序列。
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(3)熒光定量PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆中目的基因的定量檢測(cè)。在PCR反應(yīng)體系中,加入的熒光探針與模板DNA(目的基因)的某條鏈互補(bǔ)結(jié)合,當(dāng)合成的子鏈延伸至探針處,探針被酶切降解,熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)就會(huì)接收到熒光信號(hào),具體原理如圖2所示。
①可通過檢測(cè)
熒光
熒光
判定待測(cè)植物中是否含有模板DNA,且熒光達(dá)到某一特定強(qiáng)度所需的循環(huán)次數(shù)越
,模板DNA含量越高。
②通過上述技術(shù)定量檢測(cè)目的基因,需從設(shè)計(jì)的多對(duì)引物和多種探針中選擇特異性最好的組合,為此需進(jìn)行多組實(shí)驗(yàn),每個(gè)實(shí)驗(yàn)組需向反應(yīng)體系中加入
a、d、e、f、h
a、d、e、f、h
。(填字母)
a.轉(zhuǎn)基因大豆的DNA模板
b.非轉(zhuǎn)基因大豆DNA模板
c.足量的待測(cè)引物
d.定量的待測(cè)引物
e.定量的待測(cè)熒光探針
f.熱穩(wěn)定DNA聚合酶
g.解旋酶
h.足量的脫氧核苷酸(dNTP)
③預(yù)期隨時(shí)間變化,熒光強(qiáng)度達(dá)到一定值后將不再增加,這是由于
DNA復(fù)制為半保留復(fù)制
DNA復(fù)制為半保留復(fù)制
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】GR29表達(dá)的產(chǎn)物阻止草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶;重組質(zhì)粒;5'端;PstI和XhoI;熒光;少;a、d、e、f、h;DNA復(fù)制為半保留復(fù)制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:97引用:3難度:0.5
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  • 1.基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速,如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是(  )
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    發(fā)布:2024/11/14 7:0:1組卷:62引用:7難度:0.7
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    (1)通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物,涉及如下步驟,則合理的操作步驟排序是
     
    (填寫下列編號(hào))。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)?;a(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    (2)在PCR過程中,引物的功能是
     
    。
    A.啟動(dòng)DNA復(fù)制
    B.規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C.解旋DNA雙鏈
    D.充當(dāng)復(fù)制模板
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    (3)為獲得目的基因MCO(圖甲灰色表示的序列),正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    (4)獲取目的基因后,需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    (填DNA或RNA/DNA或RNA)。
    (5)在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中,溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    (6)若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端,那么載體質(zhì)粒pCLY15(圖丙中圖1)需用
     
     
    切開,才能與MCO片段高效連接。
    (7)下列實(shí)驗(yàn)操作中,能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     

    A.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,用合適的限制酶切割
    B.在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑,以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C.從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA,以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
    D.將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc(四環(huán)素)的平板上,根據(jù)大腸桿菌生長(zhǎng)與否加以鑒別

    發(fā)布:2024/11/14 4:30:2組卷:29引用:3難度:0.5
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    若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒,則產(chǎn)生的DNA片段的長(zhǎng)度為(  )

    發(fā)布:2024/11/14 4:0:2組卷:89引用:9難度:0.7
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