URA3基因位于酵母菌5號(hào)染色體上，編碼的酶參與酵母菌尿嘧啶核苷酸的合成?？蒲腥藛T利用基因工程敲除酵母菌中的URA3基因，以獲得尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型酵母菌。敲除過(guò)程中利用了PCR技術(shù)，流程如圖所示并回答下列問(wèn)題：
（1）在PCR過(guò)程中，引物的設(shè)計(jì)是關(guān)鍵。除圖示引物A1和B2外，還需設(shè)計(jì)引物A2和B1，才能通過(guò)步驟①和②分別獲得A、B片段。引物A2和B1均由40個(gè)核苷酸組成，據(jù)圖分析引物B1的5'端前20個(gè)堿基應(yīng)與 CC互補(bǔ)，后20個(gè)堿基應(yīng)與 BB互補(bǔ)。（填下列選項(xiàng)）
A．A片段的模板鏈
B．B片段的模板鏈
C．引物A2
D．引物B2
（2）在不同階段需要添加不同引物才能獲得正確的擴(kuò)增產(chǎn)物。據(jù)圖分析步驟③和④選用的引物種類（“+”代表選用，“—”代表不選用）
|
引物種類 步驟 |
引物A1 | 引物A2 | 引物B1 | 引物B2 |
| ① | + | + | — | — |
| ② | — | — | + | + |
| ③ | ||||
| ④ |
2
2
次復(fù)制。（4）從獲得的轉(zhuǎn)基因酵母菌中篩選出了多株尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型，現(xiàn)需驗(yàn)證這些菌株是因URA3基因缺失而導(dǎo)致的。選擇實(shí)驗(yàn)材料寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路。
實(shí)驗(yàn)材料：轉(zhuǎn)基因酵母菌、完全培養(yǎng)基、尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基、含URA3基因的重組質(zhì)粒、不含URA3基因的空質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路：
將轉(zhuǎn)基因酵母菌隨機(jī)分為兩組，一組導(dǎo)入含有URA3基因的重組載體，一組導(dǎo)入不含URA3基因的空質(zhì)粒，再將兩組酵母菌接種到尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基，觀察生長(zhǎng)的狀況
將轉(zhuǎn)基因酵母菌隨機(jī)分為兩組，一組導(dǎo)入含有URA3基因的重組載體，一組導(dǎo)入不含URA3基因的空質(zhì)粒，再將兩組酵母菌接種到尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基，觀察生長(zhǎng)的狀況
。【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】C；B；2；將轉(zhuǎn)基因酵母菌隨機(jī)分為兩組，一組導(dǎo)入含有URA3基因的重組載體，一組導(dǎo)入不含URA3基因的空質(zhì)粒，再將兩組酵母菌接種到尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基，觀察生長(zhǎng)的狀況
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/24 14:0:35組卷：4引用：1難度：0.6
相似題
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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