許多大腸桿菌的質(zhì)粒上含有l(wèi)acZ'基因，其編碼的產(chǎn)物B-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG 存在下，可以產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色．基因工程中常利用該原理從導(dǎo)入質(zhì)粒的受體細(xì)胞中篩選出真正導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞，過程如圖．請(qǐng)據(jù)圖回答：
（1）基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是
使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能遺傳給后代，并表達(dá)和發(fā)揮作用
使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，能遺傳給后代，并表達(dá)和發(fā)揮作用
．
（2）限制酶EcoRI的識(shí)別序列和切點(diǎn) 是-G′AATTC-，Sma I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-CCC′GGG-．圖中目的基因被切割下來和質(zhì)粒連接之前，需在目的基因的右側(cè)連接相應(yīng)的末端，連接的末端序列是-TTAA
-TTAA
，連接過程中需要的基本工具是DNA連接酶
DNA連接酶
．
（3）轉(zhuǎn)化過程中，大腸桿菌應(yīng)先用Ca2+
Ca2+
處理，使其處于能吸收周圍 DNA的狀態(tài)．
（4）菌落顏色為白色的是菌落③
菌落③
，原因是lacZ'標(biāo)記基因區(qū)插入外源基因后被破壞，不能表達(dá)出3-半乳糖苷酶，故菌落為白色
lacZ'標(biāo)記基因區(qū)插入外源基因后被破壞，不能表達(dá)出3-半乳糖苷酶，故菌落為白色
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（5）菌落③中的目的基因是否能表達(dá)，可采用的檢測(cè)辦法是抗原一抗體雜交
抗原一抗體雜交
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