通過咽拭子取樣后進行RT-PCR技術（mRNA逆轉錄為cDNA，再進行PCR擴增）檢測是目前臨床上診斷新型冠狀病毒感染疑似患者的常用方法。為檢測疑似患者是否感染了新型冠狀病毒，醫(yī)生進行了以下操作：
①分析PCR擴增結果；
②從疑似患者組織樣本中提取mRNA；
③利用PCR技術擴增cDNA片段；
④采集疑似患者組織樣本；
⑤利用mRNA進行逆轉錄得到cDNA。
回答下列問題：
（1）若要得到正確的檢測結果，正確的操作順序應該是

④②⑤③①

④②⑤③①

（用數(shù)字序號表示）。
（2）RT-PCR過程需要的酶有

逆轉錄酶和Taq酶

逆轉錄酶和Taq酶

。在進行RT-PCR擴增時，引物在退火過程中與

模板鏈相應互補序列

模板鏈相應互補序列

結合。
（3）RT-PCR的產(chǎn)物經(jīng)過BamHⅠ、EcoRⅠ雙酶切后，與經(jīng)過同樣雙酶切的PBV載體連接。這步操作程序屬于

構建基因表達載體

構建基因表達載體

，也是基因工程的核心步驟。與單一酶切相比，雙酶切具有的優(yōu)點是

防止目的基因和載體的自身連接，防止目的基因與載體反向連接

防止目的基因和載體的自身連接，防止目的基因與載體反向連接

（答出兩點）。
（4）利用RT-PCR技術獲取的目的基因

能

能

（填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術還可用于對某些微量RNA病毒的檢測，提高檢測的靈敏度，原因是

增加了待測RNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

增加了待測RNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

。