自然界中某些細(xì)菌可通過代謝將原油轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定無(wú)害的終產(chǎn)物，科學(xué)家為獲得能有效修復(fù)原油污染土壤的工程菌展開相關(guān)研究。
（1）獲得能降解原油的目標(biāo)菌可從原油污染土壤原油污染土壤取樣，樣品經(jīng)無(wú)菌水無(wú)菌水（無(wú)菌水/蒸餾水）稀釋后涂布于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分離純化后獲得目標(biāo)菌A。
（2）目標(biāo)菌A成膜性差，不能有效控制原油向深層土壤滲透。研究人員將假單胞菌的bdlA基因（約1300bp）導(dǎo)入目標(biāo)菌A體內(nèi)，嘗試構(gòu)建成膜性好的工程菌。
①假單胞菌遭受環(huán)境壓力時(shí)，會(huì)分泌大量胞外復(fù)合物將自身包裹于其中形成細(xì)菌聚集膜樣物（生物被膜），體現(xiàn)了生物對(duì)環(huán)境的適應(yīng)適應(yīng)。
②圖1為bdlA基因與pX系列質(zhì)粒連接構(gòu)建的重組質(zhì)粒模式圖，為初步檢測(cè)構(gòu)建是否成功，可選用限制酶Csp45I、XbaICsp45I、XbaI對(duì)其切割，并對(duì)酶切產(chǎn)物及重組質(zhì)粒進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖2。據(jù)圖2可初步判斷重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，依據(jù)是連接到兩個(gè)質(zhì)粒上的目的基因一致連接到兩個(gè)質(zhì)粒上的目的基因一致。
（3）上述方法獲得的兩種工程菌命名為KT2和KT5，在不同時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)組中工程菌及對(duì)照組中導(dǎo)入普通質(zhì)粒的目標(biāo)菌A導(dǎo)入普通質(zhì)粒的目標(biāo)菌A的生物被膜總量相對(duì)值，結(jié)果如圖3所示。該結(jié)果表明在36t/h時(shí)KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對(duì)值顯著提高在36t/h時(shí)KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對(duì)值顯著提高。
（4）若要將以上工程菌用于原油污染土壤的修復(fù)，舉一例說明下一步還應(yīng)進(jìn)行哪些方面的研究如何擴(kuò)大培養(yǎng)如何擴(kuò)大培養(yǎng)？
【考點(diǎn)】基因工程的基本操作程序．
【答案】原油污染土壤；無(wú)菌水；適應(yīng)；Csp45I、XbaI；連接到兩個(gè)質(zhì)粒上的目的基因一致；導(dǎo)入普通質(zhì)粒的目標(biāo)菌A；在36t/h時(shí)KT2和KT5兩種工程菌的生物被膜量相對(duì)值顯著提高；如何擴(kuò)大培養(yǎng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：36引用：2難度：0.6
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1．p53基因是一種抑癌基因，在惡性腫瘤患者中突變率達(dá)50%以上。與人相比，大象體內(nèi)含有多對(duì)p53基因，推測(cè)是其很少患腫瘤的主要原因。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究人p53基因在乳腺腫瘤細(xì)胞中的作用，回答下列問題：
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增p53基因。首先根據(jù)p53基因的核苷酸序列，設(shè)計(jì)并合成，其能與變性p53基因單鏈結(jié)合，在催化作用下延伸，如此循環(huán)多次。
（2）p53基因表達(dá)載體的構(gòu)建。如圖所示，表達(dá)載體上除了標(biāo)注的DNA片段外，在p53基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是，其作用機(jī)理是。外源p53基因插入載體中至少需要兩種工具酶，包括準(zhǔn)確切割DNA的限制性核酸內(nèi)切酶和將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)的。
（3）乳腺腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。完成倫理學(xué)審查和病人知情同意書簽署后，將患者乳腺腫瘤組織塊剪碎，制成細(xì)胞懸液在適宜的條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)環(huán)境中所需的主要?dú)怏w包括細(xì)胞代謝必需的和維持培養(yǎng)液pH值的。保持培養(yǎng)環(huán)境處于無(wú)菌無(wú)毒條件的操作包括（答出兩點(diǎn)即可）。
（4）檢測(cè)p53基因表達(dá)對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞增殖的影響。分別將空載體和p53表達(dá)載體轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)，采用特殊方法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，并從培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的進(jìn)行雜交，檢測(cè)p53基因翻譯成蛋白質(zhì)的情況，探索雜交帶強(qiáng)度與細(xì)胞增殖率相關(guān)性。發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：58引用：5難度：0.6 -
2．胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）介導(dǎo)法的主要操作過程是：將外源基因?qū)肱咛ジ杉?xì)胞，然后將轉(zhuǎn)基因的胚胎干細(xì)胞注射于受體動(dòng)物胚胎后可參與受體的胚胎構(gòu)成。如圖是利用胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法培育出熒光小鼠的過程?；卮鹣铝袉栴}：
（1）從水母中獲取綠色熒光蛋白基因有多種方法。將水母的全部基因用限制性內(nèi)切核酸酶切成片段，插入到載體分子中，并將所得的轉(zhuǎn)入大腸桿菌進(jìn)行克隆保存，這些大腸桿菌的群體稱為。
（2）②過程中用到了酶和酶，③過程常用方法，⑥過程通常要對(duì)受體母鼠進(jìn)行處理后才可進(jìn)行胚胎移植。
（3）關(guān)于受體母鼠妊娠產(chǎn)下的子代小鼠的特點(diǎn)，下列敘述正確的是。
A.各細(xì)胞都有綠色熒光蛋白基因，所以全身每個(gè)細(xì)胞都有綠色熒光蛋白產(chǎn)生
B.各細(xì)胞都有綠色熒光蛋白基因，但只有部分細(xì)胞有綠色熒光蛋白產(chǎn)生
C.不是所有細(xì)胞都有綠色熒光蛋白基因，所以只有部分細(xì)胞有綠色熒光蛋白產(chǎn)生
D.該小鼠產(chǎn)生的配子中含綠色熒光蛋白基因的概率為12發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：4引用：1難度：0.7
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