PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)的縮寫，是一項在體外提供參與DNA復(fù)制的組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復(fù)制的技術(shù)。如圖為PCR獲取并擴增目的基因的示意圖，引物的3端有結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5′端堿基無嚴格限制。據(jù)圖回答下列問題：
（1）PCR的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，PCR過程中所用的酶是 耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）。
（2）PCR的每次循環(huán)一般包括 變性、復(fù)性、延伸變性、復(fù)性、延伸三步，在PCR過程中，新合成的DNA子鏈的延伸方向是 5’→3’5’→3’，PCR獲取目的基因時；在第 33次循環(huán)后反應(yīng)體系中可出現(xiàn)目的基因。
（3）PCR獲取目的基因時，引物的作用是 界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸。為了方便目的基因與質(zhì)粒的連接，可在引物的5’5’端添加限制酶識別序列。若引物上的限制酶識別序列為CCC↓GGG，在用一種酶連接目的基因與質(zhì)粒時，所用的酶為 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。
（4）科學(xué)設(shè)計引物是PCR能否成功的關(guān)鍵。若引物的堿基過多或引物的G、C含量過高，會造成PCR的效率偏低，收獲的目的基因較少，原因是 引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）。若對PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有兩個或多個條帶，從引物角度分析，原因可能是 引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）；變性、復(fù)性、延伸；5’→3’；3；界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸；5’；T4DNA連接酶；引物與模板鏈結(jié)合過于緊密，變性時引物不易與模板鏈脫離（影響變性）；引物過短導(dǎo)致引物的特異性下降
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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