T—DNA插入失活技術是目前使用最為廣泛的植物基因敲除手段，該技術利用農桿菌T—DNA介導轉化，將一段帶有報告基因的DNA序列整合到植物基因組DNA上，如果這段DNA插入到靶基因（待敲除基因）內部或附近，就會導致靶基因失活?；卮鹣铝袉栴}：
（1）轉化是指 目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程。使用T—DNA介導轉化的原因是 T—DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上T—DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上。
（2）T—DNA在植物基因組中會發(fā)生隨機整合，可利用PCR技術進行鑒定。圖1為靶基因（共900bp）部分堿基序列，經基因敲除處理后得到的三種植株的靶基因PCR擴增產物的電泳結果如圖2。
①PCR時應加入依據靶基因序列設計的兩種引物，請寫出引物的序列 GACCTG、CAATCCGACCTG、CAATCC（每個序列寫出6個堿基即可）。除上述兩種引物外還應加入依據 報告基因報告基因序列設計的一種引物，目的是 確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中。
②已知目標植物為二倍體，分析出現圖2中B種情況的原因是 將一對靶基因中的一個基因敲除將一對靶基因中的一個基因敲除。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程；T—DNA能轉移到被侵染的細胞，并整合到該細胞的染色體DNA上；GACCTG、CAATCC；報告基因；確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中；將一對靶基因中的一個基因敲除
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10難度：0.7
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6難度：0.6 -
2．PCR技術不僅可以擴增目的基因，還可用于定點誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點突變技術。大引物PCR需要用到引物進行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據目的基因序列設計引物，得到兩個常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據突變堿基所處序列位置設計突變上游引物，突變位點位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進行第一次PCR反應得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個常規(guī)上游引物進行第二次PCR擴增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該PCR擴增技術所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應中，形成圖示雙鏈DNA至少要經過次復制。第一次PCR的產物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是。
（3）如果要利用微生物進一步克隆PCR定點誘變產物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質粒進行連接后，需先用處理農桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，將馬鈴薯細胞培養(yǎng)成幼苗時經過的兩個過程是。檢測目的基因是否在馬鈴薯細胞中轉錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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