抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物的推廣可有效減輕除草勞動(dòng)強(qiáng)度、提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率。圖1為抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米的技術(shù)流程。

（1）構(gòu)建含除草劑抗性基因的表達(dá)載體，傳統(tǒng)的方法是目的基因通過(guò)酶與載體進(jìn)行重組。載體上目的基因插入位點(diǎn)的限制酶識(shí)別序列

不能

不能

（填“能“或“不能“）出現(xiàn)在目的基因內(nèi)部，可通過(guò)

PCR

PCR

技術(shù)在目的基因兩側(cè)添加相應(yīng)限制酶識(shí)別序列，以便構(gòu)建表達(dá)載體。
（2）為了減少限制酶識(shí)別序列的影響，科研人員研發(fā)了新的DNA重組方法：無(wú)縫克隆In-Fusion技術(shù)（圖2），其中In-Fusion酶可以將任何具有相同15bp末端序列的線性DNA分子進(jìn)行連接，類(lèi)似同源重組。
①科研人員希望應(yīng)用以上方法構(gòu)建含有A和GUS基因的正組DNA分子，首先獲得了3種DNA分子如圖3，然后混合進(jìn)行In-Fusion反應(yīng)。如果引物2上額外添加的片段對(duì)應(yīng)于GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上額外增加的片段分別對(duì)應(yīng)載體中的片段

a、d

a、d

。完成重組反應(yīng)后，將產(chǎn)物表達(dá)載體加入經(jīng)過(guò)處理的農(nóng)桿菌中。
②為篩選成功轉(zhuǎn)入目標(biāo)重組DNA分子的菌落，可以選取引物

1、4

1、4

擴(kuò)增目的基因并電泳檢測(cè)。請(qǐng)?jiān)趫D4中畫(huà)出陽(yáng)性菌落的電泳結(jié)果。
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時(shí)，用含

除草劑

除草劑

的選擇培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。轉(zhuǎn)化過(guò)程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化愈傷組織（假陽(yáng)性）也可能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。已知報(bào)告基因GUS表達(dá)產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色，請(qǐng)敘述排除假陽(yáng)性的原理。

用無(wú)色物質(zhì)K處理愈傷組織，呈現(xiàn)藍(lán)色的就是轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織

用無(wú)色物質(zhì)K處理愈傷組織，呈現(xiàn)藍(lán)色的就是轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織

。