玉米是我國(guó)重要的糧食作物和飼料來(lái)源,低溫會(huì)影響玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)。研究者將從微生物中獲得的CSP(冷激蛋白)基因與玉米基因的ubi啟動(dòng)子相連后構(gòu)建基因表達(dá)載體,并將其導(dǎo)入玉米細(xì)胞中,獲得了具有低溫耐受性的玉米植株,如圖1所示。請(qǐng)回答:
(1)研究者提取玉米的DNA,可利用PCRPCR技術(shù)將ubi啟動(dòng)子擴(kuò)增出來(lái)。圖1所示過(guò)程①需限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶的催化,獲得的ubi-CSP基因在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)須插入到T-DNA片段中的原因是只有T-DNA片段可整合到植物的染色體上只有T-DNA片段可整合到植物的染色體上。
(2)過(guò)程②需要用CaCl2溶液CaCl2溶液處理農(nóng)桿菌以利于重組DNA的導(dǎo)入。影響過(guò)程③的因素主要有農(nóng)桿菌的種類(lèi)、外植體的類(lèi)型及狀態(tài)、共培養(yǎng)的時(shí)間等農(nóng)桿菌的種類(lèi)、外植體的類(lèi)型及狀態(tài)、共培養(yǎng)的時(shí)間等,一般來(lái)說(shuō)只有處于細(xì)胞周期S期S期(時(shí)期)的細(xì)胞才具有被轉(zhuǎn)化的能力。為了減小農(nóng)桿菌對(duì)愈傷組織再分化的影響,需要在培養(yǎng)基中添加抗生素抗生素。
(3)研究者分別提取了野生型玉米及5株轉(zhuǎn)基因玉米的染色體DNA,用限制性核酸內(nèi)切酶處理后進(jìn)行電泳。電泳后的DNA與基因探針進(jìn)行雜交,得到圖2所示放射性檢測(cè)結(jié)果,該結(jié)果表明第1、2、4、51、2、4、5株CSP基因已整合到玉米染色體基因組。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】PCR;限制酶和DNA連接酶;只有T-DNA片段可整合到植物的染色體上;CaCl2溶液;農(nóng)桿菌的種類(lèi)、外植體的類(lèi)型及狀態(tài)、共培養(yǎng)的時(shí)間等;S期;抗生素;1、2、4、5
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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