美西螈具有很強再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細(xì)胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細(xì)胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下、回答下列問題：
（一）基因工程抗原的制備
（1）根據(jù)美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR擴增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3-OH與加入的脫氧核苷酸的5-P形成磷酸二酯鍵，則新合成鏈的延伸方向是 5'→3'5'→3'（填“5'→3'”或“3'→5'”）。
（2）載體和CD14片段的酶切位點及相應(yīng)的酶切抗性基因序列如圖1所示。用XhoⅠ和SalⅠ分別酶切CD14和載體后連接，CD14接入載體時會形成正向連接和反向連接的兩種重組DNA。 可以可以（可以/不能）用這兩種限制酶對CD14的連接方向進(jìn)行鑒定，理由是 若是正向連接，XhoⅠ和SalⅠ能分別識別各自的特異性序列，并將CD14切下。若是反向連接，重組DNA沒有XhoⅠ和SalⅠ能識別的特異性序列若是正向連接，XhoⅠ和SalⅠ能分別識別各自的特異性序列，并將CD14切下。若是反向連接，重組DNA沒有XhoⅠ和SalⅠ能識別的特異性序列。
培養(yǎng)能表達(dá)CD14蛋白的大腸桿菌，分離純化目的蛋白。
（二）抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示：
（3）步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射 CD14蛋白CD14蛋白和 能產(chǎn)生CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞。
（4）步驟②所用的SP2/0細(xì)胞的生長特點是 能無限增殖能無限增殖。
（5）吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據(jù)抗原一抗體雜交原理，需加入 標(biāo)記的CD14蛋白標(biāo)記的CD14蛋白進(jìn)行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現(xiàn)有些雜交瘤細(xì)胞不能分泌抗CD14抗體，原因是 形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體。
（6）步驟⑥從 小鼠腹水小鼠腹水中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細(xì)胞。
【答案】5'→3'；可以；若是正向連接，XhoⅠ和SalⅠ能分別識別各自的特異性序列，并將CD14切下。若是反向連接，重組DNA沒有XhoⅠ和SalⅠ能識別的特異性序列；CD14蛋白；能產(chǎn)生CD14抗體的雜交瘤細(xì)胞；能無限增殖；標(biāo)記的CD14蛋白；形成雜交瘤細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體；小鼠腹水
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/30 9:0:8組卷：18引用：2難度：0.6
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1．CD47是一種跨膜糖蛋白，它可與巨噬細(xì)胞表面的信號調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，從而抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤細(xì)胞表面的CD47含量比正常細(xì)胞高1.6～5倍，導(dǎo)致吞噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的清除效果減弱。科學(xué)家推測，抗CD47的單克隆抗體可以解除CD47對巨噬細(xì)胞的抑制作用，為此他們按照如圖流程進(jìn)行了實驗。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：7引用：3難度：0.6 -
2．雙特異性抗體是指一個抗體分子可以與兩個不同抗原或同一抗原的兩個不同抗原表位相結(jié)合，目前最常利用雜交瘤雜交法來制備。長春花是原產(chǎn)于非洲東海岸的野生花卉，其所含的長春堿具有良好的抗腫瘤作用。圖1是某雙特異性抗體作用圖。圖2是科研人員通過雜交—雜交瘤細(xì)胞技術(shù)（免疫的B淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞雜交技術(shù)）生產(chǎn)能同時識別癌胚抗原和長春堿的雙特異性單克隆抗體的部分過程。請分析回答下列問題：
（1）與植物體細(xì)胞雜交相比，圖2中過程②特有的誘導(dǎo)融合的方法是，過程②選用的骨髓瘤細(xì)胞（選填“能”或“不能”）在HAT培養(yǎng)基上生長。
（2）對③篩選出的雜交瘤細(xì)胞，還需進(jìn)行和，才能篩選出足夠量的既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。與傳統(tǒng)血清抗體相比，單克隆抗體最主要的優(yōu)點是（答出一點）。
（3）圖2中①步驟注射癌胚抗原的目的是。圖2方框內(nèi)需要經(jīng)過次篩選，才能獲取單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞。體外培養(yǎng)到一定時期的單克隆雜交—雜交瘤細(xì)胞會因為、有害代謝物的積累和培養(yǎng)液中營養(yǎng)物質(zhì)缺乏等因素而分裂受阻，需進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
（4）與直接使用長春堿相比，將長春堿與雙特異性單克隆抗體結(jié)合后給藥，對人體的副作用更小，原因是。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：21引用：4難度：0.5 -
3．使用高效的細(xì)胞毒素藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞但細(xì)胞毒素沒有特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時還會對健康細(xì)胞造成傷害。這限制了它在臨床上的應(yīng)用。抗體一藥物偶聯(lián)物（ADC）通過將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷ADC通常由抗體、接頭和藥物（如細(xì)胞毒素）三部分組成，它的作用機制如圖所示。下列敘述正確的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 3:30:1組卷：18引用：2難度：0.7
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