病毒必須寄生在活的宿主細(xì)胞中進(jìn)行增殖，因此培養(yǎng)病毒需要先培養(yǎng)宿主細(xì)胞，再接種病毒。培養(yǎng)細(xì)菌只需要提供含有各種營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。雙層平板法（如圖）是對(duì)噬菌體進(jìn)行檢測(cè)、計(jì)數(shù)的常用方法，該方法的操作流程為：倒底層平板→倒上層平板→培養(yǎng)→觀察→計(jì)數(shù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題。
（1）底層平板是含2%瓊脂的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，制備該培養(yǎng)基的一般步驟為：計(jì)算→稱量→溶化→
調(diào)pH
調(diào)pH
→分裝、包扎→滅菌
滅菌
→倒平板；培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)除了將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性外，還要考慮 滲透壓
滲透壓
等條件，因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度太高會(huì)使細(xì)胞失水，抑制微生物的生長(zhǎng)；濃度太低，則不能滿足微生物生長(zhǎng)的需要。
（2）某同學(xué)制作的底層平板凹凸不平，可能的原因是 倒平板時(shí)溫度過(guò)低，導(dǎo)致部分培養(yǎng)基已經(jīng)凝固
倒平板時(shí)溫度過(guò)低，導(dǎo)致部分培養(yǎng)基已經(jīng)凝固
。
（3）倒上層平板時(shí)，先將含1%瓊脂的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基滅菌，再冷卻至45～48℃，然后加入細(xì)菌和待測(cè)噬菌體稀釋?xiě)乙旱幕旌弦?，充分混勻后迅速倒在底層平板上，隨即旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿。培養(yǎng)基常用的滅菌方法是 高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌法）
高壓蒸汽滅菌法（濕熱滅菌法）
。培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至45～48℃最主要的原因是 避免高溫殺死細(xì)菌和噬菌體
避免高溫殺死細(xì)菌和噬菌體
，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿的目的是 使混合液分布均勻，確保平板平整
使混合液分布均勻，確保平板平整
。
（4）培養(yǎng)一段時(shí)間后，在上層平板上可以看見(jiàn)一些如圖所示的空斑即噬菌斑，出現(xiàn)空斑的原因是 噬菌體侵染細(xì)菌使其裂解死亡
噬菌體侵染細(xì)菌使其裂解死亡
。稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)噬菌斑來(lái)自原液中的一個(gè)噬菌體，根據(jù)噬菌斑數(shù)目、稀釋倍數(shù)
稀釋倍數(shù)
及使用稀釋?xiě)乙旱捏w積就可推算出待測(cè)樣液中噬菌體的數(shù)量。統(tǒng)計(jì)的噬菌斑數(shù)往往比噬菌體的實(shí)際數(shù)目低，可能的原因是 一個(gè)噬菌斑可能由兩個(gè)或多個(gè)噬菌體侵染而成（兩個(gè)或多個(gè)噬菌斑重疊成一個(gè)）
一個(gè)噬菌斑可能由兩個(gè)或多個(gè)噬菌體侵染而成（兩個(gè)或多個(gè)噬菌斑重疊成一個(gè)）
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