為提高棉花的耐鹽能力，研究者將徑柳匙葉草液泡膜Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因（TaNHX2基因）轉(zhuǎn)移到棉花細(xì)胞內(nèi)，獲得耐鹽棉花。如圖為TaNHX2基因以及可與其連接的四種引物?；卮鹣铝袉栴}：

（1）在目的基因的獲取以及連接中都會(huì)用到限制酶，該酶主要來源于原核細(xì)胞，而原核細(xì)胞中DNA是裸露的，推斷限制酶不切割自身DNA的原因是

原核細(xì)胞DNA上沒有限制酶識(shí)別的序列或者存在序列但是發(fā)生了分子修飾

原核細(xì)胞DNA上沒有限制酶識(shí)別的序列或者存在序列但是發(fā)生了分子修飾

，可以看做是原核生物的“免疫系統(tǒng)”。
（2）通過反轉(zhuǎn)錄的方法獲得的TaNHX2基因若要正常表達(dá)，需要在基因上連接調(diào)控序列

啟動(dòng)子和終止子

啟動(dòng)子和終止子

，采用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，需選用的引物為

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（填圖中字母），該過程必須有引物的原因是

DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

DNA聚合酶只能從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。引物不能循環(huán)利用的原因是

合成DNA分子引物作為子鏈的片段連接在其中

合成DNA分子引物作為子鏈的片段連接在其中

，因此在具體操作中應(yīng)在PCR反應(yīng)體系中源源不斷地加入兩種引物。
（3）我國在轉(zhuǎn)基因棉花的培育上獨(dú)創(chuàng)的方法是

花粉管通道法

花粉管通道法

，為檢測棉花轉(zhuǎn)基因是否成功，可采用個(gè)體水平的檢測方法，即

將棉花種植在具有一定含鹽量的土壤中

將棉花種植在具有一定含鹽量的土壤中

，完成轉(zhuǎn)基因的棉花表現(xiàn)出耐鹽特性的機(jī)理是

液泡膜上增加了Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的數(shù)量，可在液泡內(nèi)積累無機(jī)鹽離子，升高細(xì)胞液的滲透壓

液泡膜上增加了Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的數(shù)量，可在液泡內(nèi)積累無機(jī)鹽離子，升高細(xì)胞液的滲透壓

，使棉花耐鹽性增強(qiáng)。