普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖。請分析回答：

（1）纖維細(xì)胞E6啟動子的元素組成為

C、H、O、N、P

C、H、O、N、P

基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少還有

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

等（至少答兩個），不能使用質(zhì)粒1中花椰菜病毒啟動子的原因是

纖維細(xì)胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA

纖維細(xì)胞中的RNA聚合酶不能識別和結(jié)合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA

（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增β-甘露糖苷酶基因需要根據(jù)

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

，設(shè)計(jì)特異性引物序列，假設(shè)開始時模板DNA數(shù)量為m個，PCR擴(kuò)增5個循環(huán)，理論上需要的引物數(shù)量

62m

62m

，為保證ChMnaA2能插入到質(zhì)粒2中，還需要在引物的

5′

5′

端添加限制酶識別序列。
（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達(dá)載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達(dá)載體獲得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是

5.9kb

5.9kb

和

11.8kb

11.8kb

。
（4）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維變長的原理是

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的反義RNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的反義RNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)

。