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人參皂苷Rh2是人參中重要的活性組分之一,具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等功能。我國科研人員以酵母菌為受體細(xì)胞,經(jīng)改造獲得Rh2前體物質(zhì)A高產(chǎn)的L菌株??蒲腥藛T對(duì)其繼續(xù)進(jìn)行基因工程改造,以期獲得人參皂苷Rh2高產(chǎn)的細(xì)胞工廠菌株。
(1)相比于植物細(xì)胞,選擇酵母菌作為受體細(xì)胞的主要優(yōu)勢(shì)是:
繁殖快、單細(xì)胞真核生物、細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、易培養(yǎng)、產(chǎn)物含量高、產(chǎn)物易分離
繁殖快、單細(xì)胞真核生物、細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、易培養(yǎng)、產(chǎn)物含量高、產(chǎn)物易分離

(2)前體物質(zhì)A可依次經(jīng)過P酶和N酶轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rh2。科研人員通過
PCR技術(shù)
PCR技術(shù)
方法獲得大量P和N基因片段,然后再用限制酶和
DNA連接
DNA連接
酶處理,將他們連接形成重組DNA片段??蒲腥藛T將基因編輯質(zhì)粒、引導(dǎo)序列質(zhì)粒和重組DNA片段導(dǎo)入L菌。據(jù)圖1分析,為初步篩選得到成功轉(zhuǎn)入兩種質(zhì)粒的受體菌,需要用
不含尿素和色氨酸
不含尿素和色氨酸
培養(yǎng)基。再通過分子水平技術(shù)確定重組DNA片段整合到L菌染色體上。
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(3)科研人員篩選得到成功轉(zhuǎn)化的R菌株,將其與L菌株置于相同條件下培養(yǎng),發(fā)酵一段時(shí)間后檢測(cè)人參皂苷Rh2和前體物質(zhì)A的含量,結(jié)果如圖2。據(jù)圖分析,R菌株能
能合成人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A
能合成人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A
。
(4)結(jié)合上述研究,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步提升R菌株生產(chǎn)能力的可行方案是
提取L菌的合成前體物質(zhì)A基因,構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)入R菌內(nèi),篩選人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A合成量都較高的目的R菌,然后擴(kuò)大培養(yǎng)
提取L菌的合成前體物質(zhì)A基因,構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)入R菌內(nèi),篩選人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A合成量都較高的目的R菌,然后擴(kuò)大培養(yǎng)

【答案】繁殖快、單細(xì)胞真核生物、細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少、易培養(yǎng)、產(chǎn)物含量高、產(chǎn)物易分離;PCR技術(shù);DNA連接;不含尿素和色氨酸;能合成人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A;提取L菌的合成前體物質(zhì)A基因,構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)入R菌內(nèi),篩選人參皂甙Rh2和前體物質(zhì)A合成量都較高的目的R菌,然后擴(kuò)大培養(yǎng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:17引用:6難度:0.6
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  • 1.城市降雨徑流中含多種污染物,其中有機(jī)物多環(huán)芳烴(PAHs)具有極強(qiáng)生物毒性,常積累于路邊滯留池中,產(chǎn)生持久的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。研究者構(gòu)建了一種高效降解PAHs的工程菌用于生態(tài)修復(fù)。
    (1)生態(tài)修復(fù)效果除受工程菌的降解能力限制外,還與工程菌和本地微生物之間的
     
    等有關(guān)。研究者調(diào)研滯留池中PAHs種類,發(fā)現(xiàn)以芘為主。將滯留池土壤溶液接種于添加芘的培養(yǎng)基中,篩選獲得三種菌株,再分別接種于芘作唯一碳源的培養(yǎng)基中,均無法形成菌落,說明三者均對(duì)芘有一定的
     
    ,但無法降解芘。最終篩選獲得基因工程改造的受體菌。
    (2)將控制高效降解PAHs的RHD基因與綠色熒光蛋白基因(CFP基因)融合后構(gòu)建重組質(zhì)粒,導(dǎo)入受體菌獲得工程菌。分別提取工程菌的擬核DNA與質(zhì)粒,PCR結(jié)果如圖1,可知目的基因
     

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    (3)將工程菌培養(yǎng)在以芘為唯一碳源的培養(yǎng)基中,檢測(cè)熒光強(qiáng)度及芘含量隨時(shí)間的變化,結(jié)果如圖2。
    據(jù)圖可知,熒光強(qiáng)度可作為工程菌降解芘的指標(biāo),依據(jù)是
     
    。
    (4)工程菌在特定條件下自毀可降低生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。利用以下材料,提出可自毀的工程菌的設(shè)計(jì)思路。
    T質(zhì)粒,核酸水解酶基因(nuc基因),lac啟動(dòng)子,IPTG(可誘導(dǎo)lac啟動(dòng)子啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄)
     

    (5)后續(xù)評(píng)價(jià)了可自毀工程菌對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的影響。綜合上述研究,完善技術(shù)路線圖。
     
    。

    發(fā)布:2024/11/7 19:30:1組卷:41引用:1難度:0.6
  • 2.酵母人工染色體(YAC)是由酵母細(xì)胞中必需的端粒、著絲粒和復(fù)制起始序列等與目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建成的表達(dá)載體。如圖表示利用整合有人源抗體IgM基因的YAC,培育能分泌人源抗體的小鼠的三個(gè)技術(shù)路線圖。下列相關(guān)敘述正確的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/11/8 14:0:1組卷:25引用:2難度:0.6
  • 3.我國科學(xué)家利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)將150CAG重復(fù)序列精確地插入豬成纖維細(xì)胞內(nèi)的亨廷頓蛋白(HTT)內(nèi)源性基因中,并成功培育出世界首例含人類突變H基因的模型豬,基本原理如圖。下列相關(guān)說法正確的是( ?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布:2024/11/5 0:0:1組卷:21引用:2難度:0.6
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