如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡(jiǎn)捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列，具體流程如圖（以EcoRⅠ酶切為例）：
請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）步驟Ⅰ用的EcoRⅠ主要存在于 原核原核生物中，限制酶存在于該類生物中的主要作用是 切割外源DNA，保證自身安全切割外源DNA，保證自身安全。
（2）步驟Ⅱ用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′-羥基與5′-磷酸間形成 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵；PCR每次循環(huán)一般可分為 變性、復(fù)性、延伸變性、復(fù)性、延伸（按順序書(shū)寫(xiě)）三步，其中第二步的目的是 引物與兩條模板DNA單鏈結(jié)合引物與兩條模板DNA單鏈結(jié)合。
（3）若如表所列為已知的DNA序列和設(shè)計(jì)的一些PCR引物，步驟Ⅲ選用的PCR引物必須是 ③④③④（從引物①②③④中選擇，填編號(hào)）。
| DNA 序列（虛線處省略了部分核苷酸序列） | |
|
已知序列 |
|
|
PCR 引物 |
①5′-AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′ ③5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ④5′-TCATGAGCGCATAGTT-3′ |
D
D
。A．5′-AACTATGCG----------AGCCCTT-3′
B．5′-TTGATACGC----------CGAGTAC-3′
C．5′-GCAATGCGT----------TCGGGAA-3′
D．5′-AATTCCATG----------CTGAATT-3′
【考點(diǎn)】目的基因的篩選與獲取．
【答案】原核；切割外源DNA，保證自身安全；磷酸二酯鍵；變性、復(fù)性、延伸；引物與兩條模板DNA單鏈結(jié)合；③④；D
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：39引用：1難度：0.6
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1．雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結(jié)構(gòu)如圖所示。已知ddNTP按堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式加到正在復(fù)制的DNA子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)通過(guò)PCR技術(shù)獲得被標(biāo)記且以堿基“T”為末端的、不同長(zhǎng)度的DNA子鏈片段。在反應(yīng)管中已經(jīng)有單鏈模板、引物、相關(guān)的酶和相應(yīng)的緩沖液等，還需加入的原料是（ ?。?br />
①dCTP，dGTP，dATP
②dGTP，dATP，dTTP，dCTP
③α位被32P標(biāo)記的ddTTP
④γ位被32P標(biāo)記的ddTTP發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：27引用：1難度：0.6 -
2．通過(guò)設(shè)計(jì)引物，運(yùn)用PCR技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)目的基因的定點(diǎn)誘變。如圖為基因工程中獲取突變基因的過(guò)程，其中引物1序列中含有一個(gè)堿基T不能與目的基因片段配對(duì)，但不影響引物與模板鏈的整體配對(duì)，反應(yīng)體系中引物1和引物2的5′端分別設(shè)計(jì)增加限制酶a和限制酶b的識(shí)別位點(diǎn)。有關(guān)敘述正確的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/11/19 10:30:1組卷：117引用：5難度：0.7 -
3．目前研究混雜DNA群體中的特異DNA序列，一般基于兩種不同的方法，即DNA克隆和DNA分子雜交，如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/11/22 4:0:1組卷：22引用：2難度：0.6
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