農(nóng)桿菌是—種在土壤中生活的微生物，能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，而對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。植物基因工程中常用含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌和受體植物細(xì)胞的愈傷組織共培養(yǎng)，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作?，F(xiàn)有一段抗除草劑基因編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域在克隆載體上，要將其轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞，得到抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草。
（1）在構(gòu)建表達(dá)載體的過(guò)程中，要先用限制酶對(duì)目的基因和Ti質(zhì)粒進(jìn)行切割，之后用連接酶連接形成重組質(zhì)粒?？茖W(xué)家使用了兩種不同的限制酶分別切割目的基因和Ti質(zhì)粒，原因是防止質(zhì)粒自身環(huán)化，并保證

目的基因以正確的方向與Ti質(zhì)粒進(jìn)行連接

目的基因以正確的方向與Ti質(zhì)粒進(jìn)行連接

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（2）在以上重組質(zhì)粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都應(yīng)該位于

T-DNA

T-DNA

片段內(nèi)，因?yàn)?!--BA-->

Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上

Ti質(zhì)粒上只有T-DNA片段能夠整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上

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（3）將重組的Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌可用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理。得到的農(nóng)桿菌菌液和煙草細(xì)胞愈傷組織共培養(yǎng)一段時(shí)間后，將愈傷組織置于含有

霉素

霉素

和除草劑的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行組織培養(yǎng)，通過(guò)調(diào)整

生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素（植物激素）的比例

生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素（植物激素）的比例

，使其脫分化、再分化形成轉(zhuǎn)基因植株群體P。
（4）轉(zhuǎn)入的除草劑抗性基因的遺傳符合孟德爾遺傳，且不考慮突變的情況下，讓轉(zhuǎn)基因植株P(guān)自交，F(xiàn)₁株系分隔種植，得到的F₁株系植株用除草劑處理，其中大多數(shù)株系抗性和非抗性的比例為3：1。有極少數(shù)株系不發(fā)生性狀分離，全是除草劑抗性植株，原因可能是

有兩個(gè)基因分別轉(zhuǎn)入一對(duì)同源染色體上

有兩個(gè)基因分別轉(zhuǎn)入一對(duì)同源染色體上

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