科研人員獲取了PHB2蛋白的基因編碼序列（簡(jiǎn)稱Phb2基因），利用基因工程的方法使大腸桿菌表達(dá)該蛋白，以便進(jìn)一步檢測(cè)PHB2蛋白抑制腫瘤細(xì)胞增殖和擴(kuò)散的效果。如圖是Phb2基因編碼區(qū)及所用質(zhì)粒示意圖（ori：復(fù)制原點(diǎn)；AmpR：氨芐青霉素抗性基因；lacZ：β-半乳糖苷酶基因），圖中已標(biāo)示出若干限制酶的切點(diǎn)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程操作的核心是 構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體。圖中質(zhì)粒上的啟動(dòng)子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出人類需要的蛋白質(zhì)。
（2）在利用PCR擴(kuò)增Phb2基因時(shí)，為使PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒正確連接，設(shè)計(jì)引物時(shí)可將限制酶 Xho I和Mun IXho I和Mun I的識(shí)別序列添加在對(duì)應(yīng)引物的 5'端5'端（填“3′端”或“5'端”）。PCR開始后，與a鏈相結(jié)合的引物上添加的是限制酶 XhoIXhoI的識(shí)別序列。
（3）β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落為白色。經(jīng) Ca2+Ca2+處理大腸桿菌后，與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)一段時(shí)間，將大腸桿菌接種到添加了 氨芐青霉素和 X-gal氨芐青霉素和 X-gal的培養(yǎng)基上篩選出 白白色的菌落即為工程菌種。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】構(gòu)建基因表達(dá)載體；RNA聚合酶；Xho I和Mun I；5'端；XhoI；Ca2+；氨芐青霉素和 X-gal；白
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/20 8:0:9組卷：15引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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