腦血栓是威脅人類健康的常見疾病,研究發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和腦血栓的急救藥。通過基因工程技術(shù)可以大量制備基因工程藥物t-PA。
(1)研究人員采用PCR技術(shù)可以獲得大量t-PA基因,PCR的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制,此外,除上述外獲得t-PA基因的方法還有 人工合成(或從基因文庫中獲取)人工合成(或從基因文庫中獲?。?/div>(答出1種即可)。
(2)研究表明,為心?;颊咦⑸浯罅縯-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血,其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高,若將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸,能顯著降低出血副作用。據(jù)此,先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造,然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因,可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注:如圖乙表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒,新霉素為抗生素。)請(qǐng)回答下列問題:
①以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為 蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程。已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的密碼子為UCU,因此改造后的基因決定第84位絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為 AGAAGA。
②如圖所示,需選用限制酶XmaⅠ和 BglⅡBglⅡ切開質(zhì)粒pCLY11,才能與t-PA改良基因高效連接。與單一酶酶切相比,本操作采用的雙酶切方法的優(yōu)點(diǎn)是 防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因和質(zhì)粒反向連接防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因和質(zhì)粒反向連接。
(3)將連接好的質(zhì)粒DNA導(dǎo)入大腸桿菌,含t-PA改良基因重組質(zhì)粒的細(xì)胞應(yīng)具有的性狀是 CC。
A.新霉素抗性且呈藍(lán)色
B.新霉素敏感且呈藍(lán)色
C.新霉素抗性且呈白色
D.新霉素敏感且呈白色【答案】DNA半保留復(fù)制;人工合成(或從基因文庫中獲?。?;蛋白質(zhì)工程;AGA;BglⅡ;防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因和質(zhì)粒反向連接;C【解答】【點(diǎn)評(píng)】聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。發(fā)布:2024/6/2 8:0:8組卷:18引用:3難度:0.5
(2)研究表明,為心?;颊咦⑸浯罅縯-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血,其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高,若將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸,能顯著降低出血副作用。據(jù)此,先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造,然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因,可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注:如圖乙表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒,新霉素為抗生素。)請(qǐng)回答下列問題:
①以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為
蛋白質(zhì)工程
蛋白質(zhì)工程
。已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的密碼子為UCU,因此改造后的基因決定第84位絲氨酸的模板鏈的堿基序列應(yīng)設(shè)計(jì)為 AGA
AGA
。②如圖所示,需選用限制酶XmaⅠ和
BglⅡ
BglⅡ
切開質(zhì)粒pCLY11,才能與t-PA改良基因高效連接。與單一酶酶切相比,本操作采用的雙酶切方法的優(yōu)點(diǎn)是 防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因和質(zhì)粒反向連接
防止載體和目的基因自身環(huán)化以及目的基因和質(zhì)粒反向連接
。(3)將連接好的質(zhì)粒DNA導(dǎo)入大腸桿菌,含t-PA改良基因重組質(zhì)粒的細(xì)胞應(yīng)具有的性狀是
C
C
。A.新霉素抗性且呈藍(lán)色
B.新霉素敏感且呈藍(lán)色
C.新霉素抗性且呈白色
D.新霉素敏感且呈白色
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1.數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù),其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是( )
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:6引用:2難度:0.6 -
2.PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因,還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR,其操作步驟為:
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物,得到兩個(gè)常規(guī)引物,分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物;
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物,突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物;
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增,得到突變目的基因序列。回答下列問題:
(1)PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān),DNA中G+C的含量越多,要求的變性溫度越高。其原因是
(2)在第一次PCR反應(yīng)中,形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過
(3)如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物,其步驟包括:發(fā)布:2024/12/30 23:0:2組卷:32引用:3難度:0.6 -
3.下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:3引用:3難度:0.7
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