有人說(shuō)，生物學(xué)可分為兩個(gè)階段——有PCR技術(shù)的生物學(xué)和沒(méi)有PCR技術(shù)的生物學(xué)。由此可見(jiàn)，PCR技術(shù)對(duì)于生物學(xué)發(fā)展是舉足輕重的?；卮鹣铝信cPCR相關(guān)的問(wèn)題。
（1）PCR技術(shù)的中文名稱(chēng)是
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
，其主要優(yōu)勢(shì)是 可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞外微量DNA分子的大幅增加
可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞外微量DNA分子的大幅增加
。以Taq DNA聚合酶為代表的耐高溫DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)，相比較人體細(xì)胞中的DNA聚合酶，其主要優(yōu)勢(shì)是耐高溫，可實(shí)現(xiàn) 高溫變性下DNA復(fù)制的循環(huán)進(jìn)行
高溫變性下DNA復(fù)制的循環(huán)進(jìn)行
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（2）與PCR相比，構(gòu)建RT-PCR的反應(yīng)體系主要區(qū)別有 需要逆轉(zhuǎn)錄酶，需要從高表達(dá)目的基因的細(xì)胞中提取總RNA
需要逆轉(zhuǎn)錄酶，需要從高表達(dá)目的基因的細(xì)胞中提取總RNA
。
（3）為了便于PCR擴(kuò)增的胰島素基因與表達(dá)載體連接，引物設(shè)計(jì)的主要依據(jù)有 胰島素基因兩側(cè)（3'端）的序列、在5'端添加合適的酶切位點(diǎn)或同源序列
胰島素基因兩側(cè)（3'端）的序列、在5'端添加合適的酶切位點(diǎn)或同源序列
。而用PCR鑒定是否含有目的DNA時(shí)，所用的引物組成為下圖中 甲、丙
甲、丙
，這種用于鑒定的PCR與本小題擴(kuò)增胰島素基因時(shí)引物設(shè)計(jì)的主要差異有 可以擴(kuò)增目的基因的部分特異性序列，引物不必包含酶切位點(diǎn)或同源序列
可以擴(kuò)增目的基因的部分特異性序列，引物不必包含酶切位點(diǎn)或同源序列
。
（4）首輪PCR之前和最后一輪PCR結(jié)束后應(yīng)分別注意預(yù)變性和維持最適溫度（72℃7min）一段時(shí)間，其目的主要分別是 增加大分子DNA徹底變性的概率、使子鏈充分延伸，得到更多的等長(zhǎng)目的DNA序列
增加大分子DNA徹底變性的概率、使子鏈充分延伸，得到更多的等長(zhǎng)目的DNA序列
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