有人說(shuō)，生物學(xué)可分為兩個(gè)階段——有PCR技術(shù)的生物學(xué)和沒(méi)有PCR技術(shù)的生物學(xué)。由此可見，PCR技術(shù)對(duì)于生物學(xué)發(fā)展是舉足輕重的?；卮鹣铝信cPCR相關(guān)的問(wèn)題。
（1）PCR技術(shù)的中文名稱是

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

，其主要優(yōu)勢(shì)是

可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞外微量DNA分子的大幅增加

可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞外微量DNA分子的大幅增加

。以Taq DNA聚合酶為代表的耐高溫DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)，相比較人體細(xì)胞中的DNA聚合酶，其主要優(yōu)勢(shì)是耐高溫，可實(shí)現(xiàn)

高溫變性下DNA復(fù)制的循環(huán)進(jìn)行

高溫變性下DNA復(fù)制的循環(huán)進(jìn)行

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（2）與PCR相比，構(gòu)建RT-PCR的反應(yīng)體系主要區(qū)別有

需要逆轉(zhuǎn)錄酶，需要從高表達(dá)目的基因的細(xì)胞中提取總RNA

需要逆轉(zhuǎn)錄酶，需要從高表達(dá)目的基因的細(xì)胞中提取總RNA

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（3）為了便于PCR擴(kuò)增的胰島素基因與表達(dá)載體連接，引物設(shè)計(jì)的主要依據(jù)有

胰島素基因兩側(cè)（3'端）的序列、在5'端添加合適的酶切位點(diǎn)或同源序列

胰島素基因兩側(cè)（3'端）的序列、在5'端添加合適的酶切位點(diǎn)或同源序列

。而用PCR鑒定是否含有目的DNA時(shí)，所用的引物組成為下圖中

甲、丙

甲、丙

，這種用于鑒定的PCR與本小題擴(kuò)增胰島素基因時(shí)引物設(shè)計(jì)的主要差異有

可以擴(kuò)增目的基因的部分特異性序列，引物不必包含酶切位點(diǎn)或同源序列

可以擴(kuò)增目的基因的部分特異性序列，引物不必包含酶切位點(diǎn)或同源序列

。
（4）首輪PCR之前和最后一輪PCR結(jié)束后應(yīng)分別注意預(yù)變性和維持最適溫度（72℃7min）一段時(shí)間，其目的主要分別是

增加大分子DNA徹底變性的概率、使子鏈充分延伸，得到更多的等長(zhǎng)目的DNA序列

增加大分子DNA徹底變性的概率、使子鏈充分延伸，得到更多的等長(zhǎng)目的DNA序列

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