RBD是新型冠狀病毒表面囊膜S蛋白的受體結(jié)合域肽段。Fc為人源抗體IgGⅠ的部分重鏈，能通過二硫鍵相結(jié)合形成Fc二聚體。科研人員為研制重組蛋白疫苗，構(gòu)建了融合表達(dá)RBD和Fc的重組質(zhì)粒。實驗流程圖如圖，請回答下列問題。


（1）通過重疊延伸PCR（重疊鏈相互搭橋、互為模板而延伸，最終將不同來源的DNA片段拼接起來）獲取融合基因。
①第一次PCR中，至少經(jīng)

2

2

次擴(kuò)增，可得到末端平齊且含引物2的產(chǎn)物；擴(kuò)增n次后，末端平齊且含引物2的DNA分子數(shù)量為

2ⁿ-n-1

2ⁿ-n-1

個；
②第二次PCR擴(kuò)增表達(dá)Fc的DNA片段；
③經(jīng)第三次PCR獲取融合基因，第三次PCR比第一次PCR延伸所需時間

長

長

（選填“長”或“短”），原因是

第三次PCR中待擴(kuò)增的片段長

第三次PCR中待擴(kuò)增的片段長

。
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體

分步實驗?zāi)康?/td>	簡易操作
酶切融合基因和質(zhì)粒pCDNA3.1	37℃條件下，酶切8小時，電泳鑒定、回收；酶切位點應(yīng)添加在引物① 1和4 1和4 的末端。（填引物種類）
獲取重組質(zhì)粒	將上述融合基因、質(zhì)粒和② DNA連接 DNA連接 酶一起加入反應(yīng)體系，16℃反應(yīng)過夜。
利用大腸桿菌③ 擴(kuò)增重組質(zhì)粒 擴(kuò)增重組質(zhì)粒	將產(chǎn)物加入感受態(tài)大腸桿菌培養(yǎng)液，培養(yǎng)過夜，提取更多重組質(zhì)粒。

（3）將目的基因?qū)肴伺咛ツI細(xì)胞將重組質(zhì)粒、聚乙烯亞胺溶液加入到狀態(tài)良好的人胚胎腎細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)4-5天，分離純化融合表達(dá)蛋白，推測聚乙烯亞胺溶液的作用是

使重組DNA進(jìn)入受體細(xì)胞

使重組DNA進(jìn)入受體細(xì)胞

。
（4）已知RBD二聚體疫苗比RBD單體疫苗效果更優(yōu)，推斷重組蛋白中Fc的作用是

有效介導(dǎo)RBD二聚體的形成

有效介導(dǎo)RBD二聚體的形成

。