為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將陸地棉的酶D基因與擬南芥葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導(dǎo)入油菜葉片細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。
（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，一般用PCR技術(shù)擴增，PCR擴增過程中，需加熱至90?95℃，其目的是使雙鏈DNA解聚為單鏈使雙鏈DNA解聚為單鏈；加熱至70?75℃時，互補鏈可在熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）酶的作用下延伸。
（2）如圖甲，選用限制酶CiaⅠCiaⅠ處理兩個基因后再用DNA連接DNA連接酶處理，得到A、DA、D（填圖中字母）端相連的融合基因。
（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T一DNA中，構(gòu)建基因表達載體基因表達載體并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素四環(huán)素（填“氨芐青霉素”、“卡那霉素”、“四環(huán)素”或“鏈霉素”等抗生素）的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。
（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜。
（5）在分子水平上，用抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交方法檢驗融合基因是否表達成功。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】使雙鏈DNA解聚為單鏈；熱穩(wěn)定DNA聚合（或Taq）；CiaⅠ；DNA連接；A、D；基因表達載體；四環(huán)素；將目的基因?qū)胧荏w細胞；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：3引用：3難度：0.6
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達載體，進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細胞進行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：42引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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