血友病B是凝血IX因子（hFIX）缺乏所導(dǎo)致的一種出血性疾病，通過輸血和凝血IX因子濃縮劑進(jìn)行治療療效顯著，但存在治療費用高和安全隱患。我國科研人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，使凝血IX因子基因在煙草葉片中表達(dá)，為凝血IX因子大規(guī)模生成提供了新的思路?；卮鹣铝袉栴}：
（1）科研人員選擇煙草細(xì)胞作為受體細(xì)胞，而未選擇大腸桿菌的原因是

煙草葉細(xì)胞是真核細(xì)胞，能夠?qū)FIX合成、加工和修飾，而大腸桿菌是原核細(xì)胞，產(chǎn)生的hFIX無法加工或錯誤加工

煙草葉細(xì)胞是真核細(xì)胞，能夠?qū)FIX合成、加工和修飾，而大腸桿菌是原核細(xì)胞，產(chǎn)生的hFIX無法加工或錯誤加工

（答出一點即可）。
（2）根據(jù)已知的hFIX氨基酸序列，采用

化學(xué)方法或人工合成

化學(xué)方法或人工合成

方法得到hFIX基因，并采用PCR技術(shù)擴增hFIX基因。采用該方法得到的hFIX基因堿基排列順序可以有多種，理由是

有的氨基酸有多種密碼子與之相對應(yīng)，因此由同一氨基酸序列可以得到多種RNA堿基排列順序，進(jìn)而可推測出多種基因堿基序列

有的氨基酸有多種密碼子與之相對應(yīng)，因此由同一氨基酸序列可以得到多種RNA堿基排列順序，進(jìn)而可推測出多種基因堿基序列

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（3）轉(zhuǎn)化煙草的基因表達(dá)載體的組成除了啟動子、hFIX基因和終止子之外，還需具有的結(jié)構(gòu)是

標(biāo)記基因

標(biāo)記基因

，其作用是

鑒別受體細(xì)胞中是否含有hFIX基因，從而將含有hFIX基因的細(xì)胞篩選出來（或重組DNA的篩選與鑒定）

鑒別受體細(xì)胞中是否含有hFIX基因，從而將含有hFIX基因的細(xì)胞篩選出來（或重組DNA的篩選與鑒定）

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（4）通過

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法將（3）獲得的基因表達(dá)載體導(dǎo)入煙草葉片，經(jīng)

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

過程最終獲得四株轉(zhuǎn)hFIX基因的煙草。
（5）寫出檢測hFIX基因是否翻譯成hFIX的主要實驗步驟：

將轉(zhuǎn)基因煙草制成勻漿后提取蛋白質(zhì)，用抗hFIX的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶

將轉(zhuǎn)基因煙草制成勻漿后提取蛋白質(zhì)，用抗hFIX的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶

。研究發(fā)現(xiàn)，hFIX基因在這四株轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)存在較大的差異，原因可能是

hFIX基因在轉(zhuǎn)基因煙草基因組中的拷貝數(shù)不同；hFIX基因在轉(zhuǎn)基因煙草基因組中的整合位置不同

hFIX基因在轉(zhuǎn)基因煙草基因組中的拷貝數(shù)不同；hFIX基因在轉(zhuǎn)基因煙草基因組中的整合位置不同

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