家禽體內(nèi)缺少能降解纖維素的酶，影響了家禽對(duì)谷物飼料中纖維素的吸收和利用?？蒲腥藛T將W基因（編碼一種降解纖維素的酶）導(dǎo)入乳酸桿菌細(xì)胞內(nèi)，再將其添加到谷物飼料中，以提高家禽對(duì)纖維素的利用?；卮鹣铝袉?wèn)題。
（1）如圖1是從枯草芽孢桿菌細(xì)胞克隆得到的含W基因的DNA片段，其中乙鏈?zhǔn)寝D(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸的方向?yàn)?′→3′。圖2是所用的質(zhì)粒載體。圖中EcoRⅠ、BamHⅠ、KpmⅠ、MfeⅠ、HindⅢ是限制酶及其切割位點(diǎn)（均形成黏性末端）。

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ
識(shí)別位點(diǎn)	5′G↓AATTC 3′ 3′CTTAA↓G5′	5′G↓GATCC3′ 3′CCTAG↓G5′	5′GGTAC↓C3′ 3′C↓CATGG5′	5′C↓AATTG3′ 3′GTTAA↓C5′	5′A↓AGCTT3′ 3′TTCGA↓A 5′

①為使W基因在乳酸桿菌中表達(dá)，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，切割含W基因的DNA片段需選用EcoRⅠ和HindⅢ限制酶，切割質(zhì)粒的限制酶最佳選用

Mfe I

Mfe I

和HindⅢ，再通過(guò)DNA連接酶能將W基因與質(zhì)粒進(jìn)行拼接成重組質(zhì)粒，說(shuō)明除HindⅢ外，所選限制酶應(yīng)要滿足的條件是

與EcoR I具有相同的黏性末端，且能保證目的基因和質(zhì)粒正確連接

與EcoR I具有相同的黏性末端，且能保證目的基因和質(zhì)粒正確連接

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②將所得的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，得到的乳酸桿菌還需進(jìn)行分子水平檢測(cè)是否導(dǎo)入了W基因，原因是

用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，得到的乳酸桿菌可能為導(dǎo)入重組質(zhì)?；蚩瞻踪|(zhì)粒的乳酸桿菌

用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選，得到的乳酸桿菌可能為導(dǎo)入重組質(zhì)?；蚩瞻踪|(zhì)粒的乳酸桿菌

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（2）對(duì)導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測(cè)，以確定目的基因（W基因）是否起作用。檢測(cè)過(guò)程如下：
①配制固體鑒定培養(yǎng)基：除加入水、無(wú)機(jī)鹽、剛果紅、維生素、氮源、瓊脂外，還需要添加

纖維素

纖維素

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②將培養(yǎng)的乳酸桿菌、

導(dǎo)入了空白質(zhì)粒的乳酸桿菌

導(dǎo)入了空白質(zhì)粒的乳酸桿菌

和導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌菌液分別接種于固體鑒定培養(yǎng)基上（編號(hào)為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組）。
③觀察結(jié)果：只有導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌在此培養(yǎng)基上出現(xiàn)了

透明圈

透明圈

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