Ti質(zhì)粒上的T區(qū)即為T-DNA,雖然是在原核生物中產(chǎn)生的,但是當(dāng)其整合到植物細(xì)胞核基因組后,也能進行轉(zhuǎn)錄和翻譯。如圖為用Ti質(zhì)粒作為載體進行植物基因工程的部分步驟示意圖?;卮鹣铝袉栴}:
(1)圖中①②過程需要用到的工具酶是
限制酶、DNA連接酶
限制酶、DNA連接酶
。③過程常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
。
(2)pBR322質(zhì)粒載體是研究最多、使用最早且應(yīng)用最廣泛的大腸桿菌質(zhì)粒載體之一,作為高質(zhì)量的載體,應(yīng)具備的條件有有多個限制酶切點,含有多個復(fù)制起始位點,能夠獨立復(fù)制
有多個限制酶切點,含有多個復(fù)制起始位點,能夠獨立復(fù)制
。(答2條)
(3)圖中的“植物基因”是目的基因,常用的擴增技術(shù)是PCR
PCR
,其原理是DNA復(fù)制
DNA復(fù)制
。將該基因插入到T-DNA的非必需區(qū)域而不是其它區(qū)域的原因是會破壞原有結(jié)構(gòu)導(dǎo)致基因在受體細(xì)胞內(nèi)無法穩(wěn)定存在并表達
會破壞原有結(jié)構(gòu)導(dǎo)致基因在受體細(xì)胞內(nèi)無法穩(wěn)定存在并表達
。
(4)目的基因進入受體細(xì)胞后,維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
,T-DNA雖然是在原核生物中產(chǎn)生的,但可在受體植物細(xì)胞中表達的原因是所有生物共用一套遺傳密碼
所有生物共用一套遺傳密碼
。