CRISPR-Cpf1敲除系統(tǒng)是Cpf1-crRNA復合體，利用crRNA引導Cpf1結(jié)合到靶DNA的特定序列上并切割雙鏈DNA分子。利用此系統(tǒng)在基因特定部位切割，再通過同源重組作用去除靶基因，進一步利用質(zhì)粒自身的溫敏特性將質(zhì)粒消除，從而完成基因敲除。為研究精氨酸代謝調(diào)控因子基因（argR基因）對精氨酸代謝的影響，科研人員利用上述技術敲除谷氨酸棒狀桿菌argR基因，過程如圖1。其中kanr是卡那霉素抗性基因，argR-HR1和argR-HR2是argR基因兩側(cè)的部分序列。請回答下列問題：
（1）①過程通過PCR獲得argR-HR1和argR-HR2，該過程的原料是 4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）4種游離的脫氧核苷酸（dNTP），所需的酶是 Taq酶Taq酶。
（2）②過程需要的酶是 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶，③過程應用 Ca2+（或CaCl2）Ca2+（或CaCl2）處理谷氨酸棒狀桿菌使其能吸收質(zhì)粒2。
（3）④過程經(jīng)過 轉(zhuǎn)錄、翻譯轉(zhuǎn)錄、翻譯表達出了Cpf1，與DNA復制相比，⑤過程特有的堿基互補配對方式是 A-UA-U。
（4）⑥過程中Cpf1-crRNA復合體的作用有 識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割。⑦過程在同源重組酶的作用下，谷氨酸棒狀桿菌基因組中的 argRargR基因被敲除。
（5）由于質(zhì)粒2的溫敏特性，⑧過程在37℃條件下培養(yǎng)的目的是 消除質(zhì)粒消除質(zhì)粒。
（6）為了驗證過程⑧后重組菌種的抗性，通過影印接種（A、B兩個培養(yǎng)基中接種菌種的位置相同）培養(yǎng)，結(jié)果如圖2，其中 能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株是完成目的基因被敲除的菌株。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）；Taq酶；限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶；Ca2+（或CaCl2）；轉(zhuǎn)錄、翻譯；A-U；識別DNA分子上特定的堿基序列，并進行切割；argR；消除質(zhì)粒；能在A培養(yǎng)基上生長，不能在B培養(yǎng)基上生長的菌株
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：5引用：2難度：0.7
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6