CRISPR-Cpf1敲除系統(tǒng)是Cpf1-crRNA復(fù)合體，利用crRNA引導(dǎo)Cpf1結(jié)合到靶DNA的特定序列上并切割雙鏈DNA分子。利用此系統(tǒng)在基因特定部位切割，再通過(guò)同源重組作用去除靶基因，進(jìn)一步利用質(zhì)粒自身的溫敏特性將質(zhì)粒消除，從而完成基因敲除。為研究精氨酸代謝調(diào)控因子基因（argR基因）對(duì)精氨酸代謝的影響，科研人員利用上述技術(shù)敲除谷氨酸棒狀桿菌argR基因，過(guò)程如圖1。其中kanr是卡那霉素抗性基因，argR-HR1和argR-HR2是argR基因兩側(cè)的部分序列。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）①過(guò)程通過(guò)PCR獲得argR-HR1和argR-HR2，該過(guò)程的原料是

4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）

4種游離的脫氧核苷酸（dNTP）

，所需的酶是

Taq酶

Taq酶

。
（2）②過(guò)程需要的酶是

限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶

限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶

，③過(guò)程應(yīng)用

Ca²⁺（或CaCl₂）

Ca²⁺（或CaCl₂）

處理谷氨酸棒狀桿菌使其能吸收質(zhì)粒2。
（3）④過(guò)程經(jīng)過(guò)

轉(zhuǎn)錄、翻譯

轉(zhuǎn)錄、翻譯

表達(dá)出了Cpf1，與DNA復(fù)制相比，⑤過(guò)程特有的堿基互補(bǔ)配對(duì)方式是

A-U

A-U

。
（4）⑥過(guò)程中Cpf1-crRNA復(fù)合體的作用有

識(shí)別DNA分子上特定的堿基序列，并進(jìn)行切割

識(shí)別DNA分子上特定的堿基序列，并進(jìn)行切割

。⑦過(guò)程在同源重組酶的作用下，谷氨酸棒狀桿菌基因組中的

argR

argR

基因被敲除。
（5）由于質(zhì)粒2的溫敏特性，⑧過(guò)程在37℃條件下培養(yǎng)的目的是

消除質(zhì)粒

消除質(zhì)粒

。
（6）為了驗(yàn)證過(guò)程⑧后重組菌種的抗性，通過(guò)影印接種（A、B兩個(gè)培養(yǎng)基中接種菌種的位置相同）培養(yǎng)，結(jié)果如圖2，其中

能在A培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不能在B培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株

能在A培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不能在B培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株

是完成目的基因被敲除的菌株。