科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制性內(nèi)切核酸酶切割位點(diǎn)，如圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為氨芐青霉素抗性基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，甲、乙表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建重組DNA時，可用一種或多種限制性內(nèi)切核酸酶進(jìn)行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該選用限制性內(nèi)切核酸酶

PstⅠ、SmaⅠ

PstⅠ、SmaⅠ

分別對魚抗凍蛋白基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割。
（2）基因工程中的核心步驟是

①

①

（填序號）。為了使目的基因正常表達(dá)，其上游必須有啟動子，它是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別和結(jié)合的部位。若限制酶切出了平末端，要選擇

T4DNA連接酶

T4DNA連接酶

進(jìn)行連接（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（3）圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭?xì)胞的方法稱為

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

。它是利用載體Ti質(zhì)粒中含有

T-DNA

T-DNA

，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）檢測番茄植株細(xì)胞中魚抗凍蛋白基因是否成功表達(dá)，從分子水平上常采用的方法是

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

。