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科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四種限制性內(nèi)切核酸酶切割位點，如圖是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為氨芐青霉素抗性基因），其中①～④是轉基因抗凍番茄培育過程中的相關步驟，甲、乙表示相關結構或細胞。請據(jù)圖作答：
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（1）在構建重組DNA時，可用一種或多種限制性內(nèi)切核酸酶進行切割，為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實驗中應該選用限制性內(nèi)切核酸酶
PstⅠ、SmaⅠ
PstⅠ、SmaⅠ
分別對魚抗凍蛋白基因和質(zhì)粒進行切割。
（2）基因工程中的核心步驟是
①
①
（填序號）。為了使目的基因正常表達，其上游必須有啟動子，它是
RNA聚合酶
RNA聚合酶
識別和結合的部位。若限制酶切出了平末端，要選擇
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
進行連接（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（3）圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭毎姆椒ǚQ為
農(nóng)桿菌轉化法
農(nóng)桿菌轉化法
。它是利用載體Ti質(zhì)粒中含有
T-DNA
T-DNA
，可以將目的基因整合到宿主細胞的染色體DNA上。
（4）檢測番茄植株細胞中魚抗凍蛋白基因是否成功表達，從分子水平上常采用的方法是
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
。

【答案】PstⅠ、SmaⅠ；①；RNA聚合酶；T4DNA連接酶；農(nóng)桿菌轉化法；T-DNA；抗原-抗體雜交
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/20 8:0:9組卷：0引用：2難度：0.5
相似題

  • 菁優(yōu)網(wǎng)1．圖示PIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tar為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
    表1
    pU702pZHZ8
    BglI5.7kb6.7kb
    表2
    固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） 0 1 2 5 10
    不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長狀況 +++++ +++ + - -
    +表示生長；-表示不生長。
    （1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的
     
    斷裂，切割形成的末端有
     
    兩種。
    （2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質(zhì)粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構建重組質(zhì)粒pZHZ8。上述兩種質(zhì)粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后所得片段長度見表1。由此判斷目的基因的片段長度為
     
    kb,判定目的基因中含有一個BglⅡ切割位點的理由是
     
    。
    （3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成
     
    過程。
    （4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如表2所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在
     
    μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是
     
    。若要檢測整合到染色體DNA上的目的基因是否發(fā)揮功能作用，第一步需檢測受體細胞的
     
    （填“DNA”或“RNA”），檢測方法應采用
     
    技術。

    發(fā)布：2024/11/5 22:30:2組卷：21引用：3難度：0.6

  • 2．胰蛋白酶抑制劑（TI）可抑制昆蟲蛋白酶活性，阻礙昆蟲消化蛋白質(zhì)。鹽藻是一種無細胞壁的單細胞真核綠藻，是能在高鹽條件下生長的新型生物反應器。研究人員利用基因工程技術構建TI基因的表達載體，并將其導入鹽藻細胞中，進行了一系列實驗。回答下列問題：
    （1）研究人員利用PCR技術特異性地擴增目的基因的前提是需要
     
    ，以便合成引物。PCR過程中溫度的控制至關重要，將處理溫度控制在90～95℃，是為了
     
    。
    （2）獲取目的基因后，為了構建基因表達載體，還需要使用的酶是
     
    （答出2種）。構建成功的基因表達載體應含有的結構有目的基因、啟動子、
     
    （答出3種）等結構。
    （3）研究人員將TI基因?qū)胧荏w細胞后進行了檢測，相關步驟和實驗結果如表所示。該檢測方法依據(jù)的原理是
     
    。據(jù)表分析，該實驗結果說明
     
    。
    組別 實驗步驟 實驗結果
    ① ② ③
    轉基因鹽藻（A組） 離心收集三組細
    胞制備可溶性蛋
    白質(zhì)樣品    		 將TI注射到大白
    兔體內(nèi)，獲取TI
    抗體    		 讓TI抗體和樣品
    進行混合檢測    		 有雜交帶
    非轉基因鹽藻（B組） 無雜交帶
    陽性對照組（C組） 有雜交帶

    發(fā)布：2024/11/3 15:30:2組卷：5引用：4難度：0.7

  • 3．我國科學家利用蘇云金桿菌中的Bt基因培育出轉基因抗蟲棉，下列說法錯誤的是（　　）

    發(fā)布：2024/11/4 19:0:2組卷：1引用：1難度：0.7
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